azacitidine

　　5-Azacytidine是胞苷的核苷类似物，其通过捕获 DNA甲基转移酶 特异性地抑制DNA甲基化。

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　　生物活性

　　体外研究

　　与多种基因相关的未甲基化CpG岛在肿瘤中部分或完全甲基化，并可被5-氮杂胞苷重新激活[1]。 5-氮杂胞苷在相同浓度范围内作为朋友红白血病细胞红细胞分化的弱诱导剂，它们影响DNA甲基转移酶活性。 5-氮杂胞苷抑制L1210细胞，ID50和ID90值分别为0.019和约0.15μg/ mL 。

　　体内研究

　　当动物暴露于5-阿扎胞苷（100mg / kg，腹膜内）2小时或更长时间时，TdR-3H掺入被显着

　　实验参考方法

　　azacitidine的激酶测定

　　通过将细胞悬浮于给定体积的0.05mol / LTris-HCl缓冲液（pH 7.4）中，并用Biosonik以70％最大输出进行声波提取30秒，从培养物中的LI 210细胞中分离粗无细胞提取物。 在Model L Spinco超速离心机中以105,000×g离心60分钟（4℃）后收集上清液。 无细胞提取物的最终蛋白质浓度约为3mg / mL。 提取物用作酶的来源。 测量核糖核苷酸还原酶活性。 酶单位定义为以1moleole / hr的速率催化dCMP合成的量。 用于测量嘧啶核苷（CR）和脱氧核苷（TdR，CdR）激酶的测定系统基本上是Chu和Fischer描述的那些。 然而，通过在沸水浴中加热2分钟终止反应，并根据Bach的方法分离磷酸化衍生物。 将50μl等分试样施加到1英寸的二乙氨基乙基纸盘上，然后将其置于计数小瓶中并用0.5mL 0.5mol / LPCA洗脱。 1小时后，加入12mL Diotol，测定放射性。

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

　　azacitidine的细胞分析

　　将20mL细胞（约1×10 4个细胞/ mL）用螺旋盖移液到灭菌的培养管中，并在37℃下孵育过夜。 在加入1mL代谢物（或培养基）之前，通过加入1mL 5-氮杂胞苷（5-azaCR）或培养基一段给定的时间（从0到240分钟）开始实验。 通过Model A Coulter计数器每天测定细胞生长两次，持续3天。 为了测定IDSO和ID90值，将5mL L1210细胞（5×103细胞/ mL）与药物在37℃温育3天，并测定细胞生长。

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　　Animal Administration

　　对于体内实验，给予白血病小鼠（大约1×103细胞/动物）注射i.p. 用0.2mL给定浓度的5-氮杂胞苷（5-azaCR）。 2小时后，通过注射0.5mL标记的代谢物（TdR-3H或UR-3H，10 /μCi/12.5μg）开始反应。 1小时后，通过颈椎骨折杀死动物（3只小鼠/组），用肝素处理腹水，收集，合并，然后立即在Sorvall冷冻离心机Model R2C-B中以800×g离心10分钟（ 4℃）。

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