Roflumilast罗氟司特

　　Roflumilast （APTA-2217） 是一种选择性的 PDE4 抑制剂，作用于 PDE4A1，PDEA4，PDEB1 和 PDEB2，IC50 分别为 0.7，0.9，0.7 和 0.2 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Roflumilast 不影响除 PDE4 之外的 PDE 酶，并且是大多数测试的 PDE4 剪接变体的亚纳摩尔抑制剂。除了 PDE4C （4C1，IC50=3 nM；4C2，IC50=4.3 nM） 外，它没有表现出 PDE4 亚型选择性，它被抑制的效力略低。Roflumilast 是一种有效的选择性 PDE4 抑制剂。Roflumilast 是一种单选择性 PDE4 抑制剂，因为它不影响其他 PDE 同工酶，包括浓度高达 10，000 倍的 PDE1、PDE2、PDE3 和 PDE5。Roflumilast 抑制人中性粒细胞功能。Roflumilast 抑制单核细胞来源的树突状细胞中的 TNFα 合成。Rolfumilast 抑制 CD4+ T 细胞的增殖和细胞因子合成。效力 （IC30） 为 7 nM 的 Roflumilast 最多可抑制增殖约 60%。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考

 

　　体内研究

 

　　Roflumilast 的动物研究表明，在豚鼠、小鼠或大鼠短期暴露于烟草烟雾以及大鼠暴露于烟草烟雾和细菌脂多糖的组合后，它减少了支气管肺泡灌洗液中嗜中性粒细胞的积累，并消除了暴露于烟草烟雾 7 个月的大鼠肺实质炎症细胞流入。Roflumilast 在 pIgR?/? 小鼠中阻断 COPD 进展。对于这些研究，9 个月大的 WT 或 pIgR?/? 小鼠每天通过口服强饲法处理 100 μg Roflumilast （5 μg/g） 或载体 （4% 甲基纤维素，1.3% PEG400） 3 个月，肺在 12 个月大时收获。与载体处理的 pIgR-/- 小鼠不同，Roflumilast 处理的小鼠在开始处理后小气道壁重塑没有进展。引人注目的是，与 9 个月大的 pIgR?/? 小鼠相比，Roflumilast 处理的 12 个月大的 pIgR?/? 小鼠肺气肿指数降低，表明 Roflumilast 不仅阻止了该模型中肺气肿的进展，而且显然有助于解决肺实质的肺气肿性破坏。

 

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　　实验参考方法

 

　　激酶试验

 

　　PDE活性是通过一些修改来确定的。实验混合物含有50 mM Tris （pH 7.4）， 5 mM MgCl2, 0.5 μM cAMP或cGMP，以及[3H]cAMP或[3H]cGMP（约30,000 cpm/次），抑制剂和酶溶液的指定浓度为200 μL，最终测定体积为200 μL。上述化合物的原液在上述Tris缓冲液中稀释1:100 （v/v）；在1% （v/v） DMSO/Tris缓冲液中配制适当的稀释液，在测定中以1:2 （v/v）稀释，在DMSO浓度为0.5% （v/v）时获得所需的抑制剂最终浓度。DMSO本身不影响PDE的任何活动。37°C预孵育5分钟后，加入底物（cAMP或cGMP）开始反应，37°C进一步孵育15分钟。然后加入50 μL 0.2 N HCl停止反应，冰敷10 min左右。用25 μg 5′-核苷酸酶（Crotalus atrox蛇毒液）在37℃孵育10 min后，上样于QAE Sephadex A-25 （Poly-Prep色谱柱床体积为1 mL）。用2ml 30mm甲酸铵（pH 6.0）洗脱柱，计算洗脱液的放射性。对空白值（在存在变性蛋白质的情况下测量）进行校正，该空白值低于总放射性的5%。环核苷酸的水解量不超过原始底物浓度的30%。

 

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　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　使用WT或pIgR - / -小鼠。在使用罗氟司特的研究中，给予200 μL的0.5 mg/mL罗氟司特混悬液或对照物（4%甲基纤维素、1.3% PEG400和5 μg药物/ g动物体重）灌胃，每天1次，每周5天，持续治疗。小鼠每天灌胃100 μg罗氟米司特（5 μg/g）或对照物（4%甲基纤维素，1.3% PEG400），持续3个月，12月龄时取肺。

 

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