索拉非尼Sorafenib抑制剂

　　索拉非尼Sorafenib（Bay 43-9006） 是一种有效的口服活性 Raf 抑制剂，对 Raf-1 和 B-Raf 的 IC50 分别为 6 nM 和 20 nM。Sorafenib 是一种多激酶抑制剂，对 VEGFR2，VEGFR3，PDGFRβ，FLT3 和 c-Kit 的 IC50 分别为 90 nM，15 nM，20 nM，57 nM 和 58 nM。Sorafenib 诱导细胞自噬 （autophagy）和凋亡（apoptosis），并具有抗肿瘤活性。Sorafenib 也是一种 ferroptosis 激动剂。

 

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       生物活性

        体外研究

 

　　索拉非尼Sorafenib（BAY 43-9006）对 BRAFwt （IC50 = 22nm）、 BRAFV599E （IC50 = 38nm）、 VEGFR-2（IC50 = 90nm）、 VEGFR-3（IC50 = 20nm）、 PDGFR-β （IC50 = 57nm）、 c-KIT （IC50 = 68nm）和 Flt3（IC50 = 58nm）等生化指标也有抑制作用。在 mda-mb-231乳腺癌细胞中，索拉非尼完全阻断 MAPK 通路的激活。索拉非尼Sorafenib（0.01ー3μm）预孵育细胞，并剂量依赖性抑制基础 MEK 1/2和 ERK 1/2磷酸化（IC50、40和100nm 分别）

 

　　体内研究

 

　　索拉非尼Sorafenib在人类肿瘤异种移植模型中显示了广泛的口服抗肿瘤效果。口服Sorafenib索拉非尼7.5ー60毫克/千克。与对照组相比，治疗组没有致死性和体重减轻的增加。在6个模型中的5个，每天服用索拉非尼的口服给药（30到60毫克/千克） ，在治疗过程中产生完全的肿瘤停滞。二乙基亚硝胺组生存率为73.3% ，Sorafenib索拉非尼组为83.3% ，正常对照组为100% 。与正常对照组相比，DENA 组肝指数显著升高（1.51倍，p < 0.05） ，而 Sorafenib 组肝指数显著降低（p < 0.05）。索拉非尼组肝脏指数明显低于正常对照组   相关产品：Ferrostatin-1抑制剂

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考

 

　　实验参考方法

 

　　激酶分析

 

　　为了检测复方对 RAF 激酶亚型的抑制作用，将Sorafenib索拉非尼加入 RAF-1（80ng）、 wt BRAF 或 V599E BRAF （80ng）与 MEK-1（1μg）的混合物中，在最终浓度为1% DMSO 的条件下，加入20mm Tris （ph8.2）、100mm NaCl、5mm mgcl2和0.15% β- 巯基乙醇。采用10μmγ-[33P ] ATP （400ci/mol）加入25μl，在32 ° c 培养25min，启动 RAF 激酶测定（最终体积为50μl）。磷酸化的 mek-1通过过滤到磷酸纤维素垫上获得，1% 的磷酸被用来洗去未结合的放射性。用微波加热干燥后，用 β- 平板计数器定量测定过滤结合放射性

 

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　　细胞分析

 

　　将 mda-mb-231人乳腺癌细胞株在 DMEM 培养基（10% 热灭活 FCS）中以2 × 105细胞/孔的方式在12孔培养板上过夜培养。细胞用无血清培养基洗涤一次，用含有不同浓度 bay43-9006（0.01,0.03,0.1,0.3,1,3 μM）的0.1% 无脂肪酸 BSA 在0.1% DMSO 中培养120min，测定基础 pmek1/2，pERK 1/2，pPKB 的变化。用含0.1 mM 钒酸盐的 PBS 冷水洗涤细胞，并在含有蛋白酶抑制剂的1% Triton x-100溶液中裂解。用 SDS-PAGE 离心澄清裂解产物，转移到硝酸纤维素膜上，在 TBS-BSA 封闭，用抗 pmek 1/2（Ser217/Ser221; 1:1000）、抗 mek 1/2、抗 perk 1/2（Thr202/Tyr204; 1:1000）、抗 erk 1/2、抗 ppkb （Ser473; 1:1000）或抗 pkb 初级抗体进行检测。用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二级抗体制备印迹病毒，并用 Amersham ECL 试剂在 Amersham 超薄膜上制备。

 

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　　动物实验方法

 

　　小鼠雌性 NCr-nu/nu 小鼠。荷有75至150毫克肿瘤的小鼠口服Sorafenib索拉非尼（7.5至60毫克/千克） ，连续给药9天。在每个模型中，Sorafenib索拉非尼产生剂量依赖性的肿瘤生长抑制，没有毒性证据，通过相对于对照动物的体重增加或药物相关的致死性来衡量。在抗肿瘤效果研究的同时，另外四组荷100ー200毫克肿瘤的小鼠口服给予载体或Sorafenib索拉非尼（30ー60毫克/千克） ，每天给药5天，这是治疗组产生完全肿瘤瘀血的最短治疗时间。本研究利用100ー120g 雄性白化大鼠。大鼠经过适应期后称体重，随机分为3组： 第1组（正常对照组，n = 10） ，每日给予运输工具8周。第2组（DENA 组，n = 15）单次静脉注射200mg/kg DENA。第3组（索拉非尼组，n = 12）口服Sorafenib索拉非尼，每日10mg/kg，连续2周，注射 DENA 后6周。在实验结束时（8周） ，大鼠被称重，用乙醚麻醉，杀死，解剖肝脏。新鲜的肝脏用冰冷的生理盐水洗两次，用干净的纸巾擦干，称重。肝脏指数计算为肝脏重量（g）/最终体重（g） × 100。肝脏分为五部分： 一部分用10% 的福尔马林保存以进行组织病理学检查，另一部分立即用液氮冷冻并储存在零下80摄氏度。

 

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