Quizartinib

　　Quizartinib （AC220） 是一种具有口服活性的、高选择性的，有效的第二代 Ⅱ 型 FLT3 （type II FLT3） 酪氨酸激酶抑制剂，Kd 值为 1.6 nM。Quizartinib 抑制 Wt FLT3 和 突变型 FLT3-ITD 自磷酸化，IC50 分别为 4.1 nM 和 1.1 nM。Quizartinib 可以通过优化的 linker 与 VHL 配体连接，从而形成 PROTAC Flt3 降解剂。Quizartinib 诱导细胞凋亡 （apoptosis）。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　我们将采用定制合成服务的方式为您快速提供所需产品和技术服务

 

　　生物动态

 

　　体外研究

 

　　（体外）

 

　　Quizartinib （AC220） 是一种新型化合物，专门优化为 FLT3 抑制剂，用于治疗急性髓性白血病 （AML）。Quizartinib 通过 IC 抑制 FLT3-WT 和 FLT3-ITD 自磷酸化50分别为 4.2±0.3 nM 和 1.1±0.1 nM。Quizartinib 通过 IC 抑制 MV4-11 和 A375 细胞50分别为 0.56±0.3 nM 和 >10 000 nM。Quizartinib 在细胞测定中以低纳摩尔效力抑制 FLT3，并且在针对大多数人类蛋白质激酶组进行筛选时具有高度选择性

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　日内研究

 

　　Quizartinib （AC220） 在体内抑制 FLT3 活性，以低至 1 mg/kg 的剂量在 FLT3-ITD AML 小鼠模型中显着延长存活，每天口服一次，在 10 岁时根除 FLT3 依赖性小鼠异种移植模型中的肿瘤mg/kg，并有效抑制原代患者细胞中的 FLT3 活性。Quizartinib 的口服生物利用度，在大鼠中通过比较 3 mg/kg 的口服和静脉内药代动力学测定，约为 40%。通过口服管饲法给予单次 10 mg/kg 剂量的 Quizartinib，并在给药后的 2 个时间点处死小鼠，每组使用 4 只动物。肿瘤样品中总 FLT3 和磷酸化 FLT3 的定量揭示了 FLT3 自磷酸化的时间依赖性抑制。FLT3 活性在给药后 2 小时被抑制 90%，在给药后 24 小时被抑制 40%

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶检测

 

　　进行 KinomeScan 激酶结合测定。对于 FLT3 测定，使用仅跨越催化域（氨基酸 592 至 969）的激酶构建体。该构建体不包括近膜结构域，旨在测量开放 FLT3 活性位点对抑制剂的内在结合亲和力

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　细胞检测

 

　　MV4-11 和 RS4;11 细胞分别在含有 10% 胎牛血清 （FBS） 的 Iscove 培养基和含有 10% FBS 的 RPMI 培养基中培养。对于增殖测定，细胞在低血清培养基 （0.5% FBS） 中培养过夜，然后以每孔 40 000 个细胞接种在 96 孔板中。将抑制剂（例如，Quizartinib）加入到细胞中并在 37°C 下孵育 72 小时。使用 Cell Titer-Blue Cell Viability Assay 测量细胞活力。为了测量 FLT3 自磷酸化的抑制作用，将细胞在低血清培养基 （0.5% FBS） 中培养过夜，并在第二天以每孔 400 000 个细胞的密度接种在 96 孔板中。细胞与抑制剂（例如，Quizartinib）在 37°C 下孵育 2 小时。为了在 RS4;11 细胞中诱导 FLT3 自磷酸化，在化合物孵育 2 小时后加入 100 ng/mL FLT3 配体 15 分钟。制备细胞裂解物并在预涂有总 FLT3 捕获抗体的 96 孔板中孵育。将包被的板与抗 FLT3 的生物素化抗体孵育以检测总 FLT3，或与抗磷酸酪氨酸抗体孵育以检测 FLT3 自身磷酸化。在这两种情况下，均使用 SULFO 标记的链霉亲和素二抗在 Meso Scale Discovery 平台上进行电化学发光检测

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　老鼠

 

　　使用雌性 NU/NU 或严重联合免疫缺陷小鼠。Quizartinib（盐酸盐）在 22% 羟丙基-β-环糊精中配制，CEP-701 在 20% gelucire 44/14 水溶液（体积/体积）中配制，MLN-518 和 SU 11248 在 10 mM 柠檬酸钠中配制（ pH 3.5），PKC-412 在 3:1 凝胶 44/14-丙二醇 （vol/vol） 中配制，Bay 43-9006 在 80% PEG-400 中配制。选择化合物浓度以提供 10 mL/kg 体积的所需剂量。通过在给药后 0.25、0.5、1、2、4、6 和 24 小时收集的口服管饲法和血浆样品给予化合物。为了收集血浆样品，使用 3 组每组 3 只动物半纵向采集眼部出血 （150 μL），每只动物取 2 至 3 个时间点以获得总共 3 个独立的血浆浓度时间过程。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。