Wortmannin分子量
2019-03-18 
MCE小分子
Wortmannin是可渗透细胞，不可逆的 (PI3Ks) 抑制剂，IC50 为3 nM。 Wortmannin还可抑制 DNA-PK 和 ATM，IC50分别为16 nM 和 150 nM。
Wortmannin分子量：428.43
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
生物活性
Wortmannin体外研究
Wortmannin不可逆地抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-激酶）活性，与110-kDa蛋白结合（IC50为3 nM），对RBL-2H3细胞中的PI4-激酶没有影响。 Wortmannin还抑制FcεRI介导的组胺分泌和白三烯释放，对酪氨酸激酶Lyn的激活没有影响。 在完整的A549肺腺癌细胞中，渥曼青霉素在与放射增敏所需的浓度密切相关的浓度下抑制DNA-PK和ATM。 此外，用渥曼青霉素预处理A549细胞导致抗辐射DNA合成，这是ATM缺陷细胞的特征性异常。 渥曼青霉素对MLCK的抑制不受钙调蛋白或肽底物的影响，而高浓度的ATP则会降低。 渥曼青霉素直接与MLCK的催化结构域相互作用，并导致酶活性的不可逆损失。 Wortmannin对cAMP依赖性蛋白激酶，cGMP依赖性蛋白激酶和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II无抑制作用，对蛋白激酶C活性影响不大。 Wortmannin也是Polo样激酶3（Plk3）的有效抑制剂。 Wortmannin有效抑制纯化的Plk3的活性，IC50为48 nM。 渥曼青霉素是Plk1和AX7503的有效抑制剂，四甲基罗丹明 - 渥曼青霉素缀合物是用于标记Plk1的活性依赖性探针。 渥曼青霉素抑制Plk1-AX7503反应性，IC50为5.8nM。 渥曼青霉素以剂量依赖性方式抑制Plk3与AX7503反应。 用于抑制AX7503标记Plk3的渥曼青霉素的IC 50值确定为49nM。 Wortmannin通过靶向其ATP结合位点中的保守赖氨酸残基共价标记Plk1和Plk3。 渥曼青霉素抑制Plk1和Plk3的效力与其对PI3K的抑制相似。 Wortmannin也抑制Plk2和Plk4。
体内
Wortmannin在小鼠的正常组织（肺，心脏和脑匀浆）和肿瘤组织中抑制磷脂酰肌醇3-激酶 - 蛋白激酶B（PKB）/ Akt磷酸化，没有死亡率或0.7mg / kg的急性毒性。 结合LY188011，渥曼青霉素可显着增加细胞凋亡，抑制原位肿瘤的肿瘤生长，而单药治疗均不能。 渥曼青霉素（1 mg / kg）抑制小鼠SW1990的腹膜转移，没有任何体重减轻。
Wortmannin的实验参考方法
Wortmannin的激酶测定
用肽底物（KKRPQRATSNVFS-NH2）或肌球蛋白轻链测定MLCK活性。 肽底物（24μM）在含有25mM Tris-HCl（pH 7.5），0.5mg / mL牛血清白蛋白，4mM MgCl 2,0.5mM CaCl 2,2.6nM钙调蛋白，1.5nM MLCK和400的反应混合物中磷酸化。 μMATP，终体积为0.25 mL。 在没有ATP的28℃下预孵育10分钟后，通过在28℃下加入ATP开始反应，并在30分钟后通过加入0.1mL 10％（v / v）乙酸终止反应。 通过高效液相色谱分析混合物：柱，Unisil Pack 5C18 4.6×150mm; 溶剂，18％（v / v）乙腈，0.1％（v / v）三氟乙酸水溶液; 流速，1.0 mL / min; 温度，40°C; 检测，220nm处的吸光度。 由磷酸化形式的峰面积与未磷酸化形式的峰面积之比计算反应百分比。 在上述条件下测量的比活性为0.81μmol/ min / mg。 肌球蛋白轻链（108μg/ mL）在含有25mM Tris-HCl（pH 7.5），0.5mg / mL牛血清白蛋白，4mM MgCl 2,0.5mM CaCl 2,4.2nM钙调蛋白，0.92nM酶的反应混合物中磷酸化， 和10μM[γ-32P] ATP（100-900cpm / pmol），终体积为0.25mL。 在没有ATP的30℃下预孵育3分钟后，通过在30℃下加入[γ-32P] ATP开始反应，并在5分钟后通过加入0.125mL三氯乙酸终止反应。 将酸可沉淀的材料收集在硝酸纤维素膜过滤器上，并用4mL 1mL等分试样的5％（v / v）三氯乙酸洗涤。 使用Packard Tri-Carb液体闪烁光谱仪4530型在甲苯闪烁液中测量过滤器上的放射性。在该条件下测量的比活性为1.23μmol/ min / mg。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
将无特定病原体的无病毒BALB / c雄性小鼠（5周）保持在无菌条件下，在具有过滤盖的笼子中的层流室中，并喂食灭菌的小鼠饮食和水。 为了诱导腹膜转移，通过吸入给予七氟醚麻醉小鼠，并且在没有FBS的情况下孵育后，使用23号针将SW1990细胞（1×10 6细胞/小鼠）在100μLPBS中注射到腹膜腔中。 24小时灭活Akt。 为了检查PI3K抑制剂的作用，在接种癌细胞后立即用1.0,0.5或0.25mg / kg /天的渥曼青霉素或载体（PBS +二甲基亚砜）腹膜内处理小鼠。治疗持续连续20天。 二十天后，处死小鼠并检查腹膜转移性肿瘤的体重，腹水，数量和总重量。 超过相同年龄（数周）的正常裸鼠的肠系膜和更大网膜的平均重量的重量被认为是转移性肿瘤的净重，以便最小化血液或组织的混合。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Wortmannin分子量：428.43
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
生物活性
Wortmannin体外研究
Wortmannin不可逆地抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-激酶）活性，与110-kDa蛋白结合（IC50为3 nM），对RBL-2H3细胞中的PI4-激酶没有影响。 Wortmannin还抑制FcεRI介导的组胺分泌和白三烯释放，对酪氨酸激酶Lyn的激活没有影响。 在完整的A549肺腺癌细胞中，渥曼青霉素在与放射增敏所需的浓度密切相关的浓度下抑制DNA-PK和ATM。 此外，用渥曼青霉素预处理A549细胞导致抗辐射DNA合成，这是ATM缺陷细胞的特征性异常。 渥曼青霉素对MLCK的抑制不受钙调蛋白或肽底物的影响，而高浓度的ATP则会降低。 渥曼青霉素直接与MLCK的催化结构域相互作用，并导致酶活性的不可逆损失。 Wortmannin对cAMP依赖性蛋白激酶，cGMP依赖性蛋白激酶和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II无抑制作用，对蛋白激酶C活性影响不大。 Wortmannin也是Polo样激酶3（Plk3）的有效抑制剂。 Wortmannin有效抑制纯化的Plk3的活性，IC50为48 nM。 渥曼青霉素是Plk1和AX7503的有效抑制剂，四甲基罗丹明 - 渥曼青霉素缀合物是用于标记Plk1的活性依赖性探针。 渥曼青霉素抑制Plk1-AX7503反应性，IC50为5.8nM。 渥曼青霉素以剂量依赖性方式抑制Plk3与AX7503反应。 用于抑制AX7503标记Plk3的渥曼青霉素的IC 50值确定为49nM。 Wortmannin通过靶向其ATP结合位点中的保守赖氨酸残基共价标记Plk1和Plk3。 渥曼青霉素抑制Plk1和Plk3的效力与其对PI3K的抑制相似。 Wortmannin也抑制Plk2和Plk4。
体内
Wortmannin在小鼠的正常组织（肺，心脏和脑匀浆）和肿瘤组织中抑制磷脂酰肌醇3-激酶 - 蛋白激酶B（PKB）/ Akt磷酸化，没有死亡率或0.7mg / kg的急性毒性。 结合LY188011，渥曼青霉素可显着增加细胞凋亡，抑制原位肿瘤的肿瘤生长，而单药治疗均不能。 渥曼青霉素（1 mg / kg）抑制小鼠SW1990的腹膜转移，没有任何体重减轻。
Wortmannin的实验参考方法
Wortmannin的激酶测定
用肽底物（KKRPQRATSNVFS-NH2）或肌球蛋白轻链测定MLCK活性。 肽底物（24μM）在含有25mM Tris-HCl（pH 7.5），0.5mg / mL牛血清白蛋白，4mM MgCl 2,0.5mM CaCl 2,2.6nM钙调蛋白，1.5nM MLCK和400的反应混合物中磷酸化。 μMATP，终体积为0.25 mL。 在没有ATP的28℃下预孵育10分钟后，通过在28℃下加入ATP开始反应，并在30分钟后通过加入0.1mL 10％（v / v）乙酸终止反应。 通过高效液相色谱分析混合物：柱，Unisil Pack 5C18 4.6×150mm; 溶剂，18％（v / v）乙腈，0.1％（v / v）三氟乙酸水溶液; 流速，1.0 mL / min; 温度，40°C; 检测，220nm处的吸光度。 由磷酸化形式的峰面积与未磷酸化形式的峰面积之比计算反应百分比。 在上述条件下测量的比活性为0.81μmol/ min / mg。 肌球蛋白轻链（108μg/ mL）在含有25mM Tris-HCl（pH 7.5），0.5mg / mL牛血清白蛋白，4mM MgCl 2,0.5mM CaCl 2,4.2nM钙调蛋白，0.92nM酶的反应混合物中磷酸化， 和10μM[γ-32P] ATP（100-900cpm / pmol），终体积为0.25mL。 在没有ATP的30℃下预孵育3分钟后，通过在30℃下加入[γ-32P] ATP开始反应，并在5分钟后通过加入0.125mL三氯乙酸终止反应。 将酸可沉淀的材料收集在硝酸纤维素膜过滤器上，并用4mL 1mL等分试样的5％（v / v）三氯乙酸洗涤。 使用Packard Tri-Carb液体闪烁光谱仪4530型在甲苯闪烁液中测量过滤器上的放射性。在该条件下测量的比活性为1.23μmol/ min / mg。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
将无特定病原体的无病毒BALB / c雄性小鼠（5周）保持在无菌条件下，在具有过滤盖的笼子中的层流室中，并喂食灭菌的小鼠饮食和水。 为了诱导腹膜转移，通过吸入给予七氟醚麻醉小鼠，并且在没有FBS的情况下孵育后，使用23号针将SW1990细胞（1×10 6细胞/小鼠）在100μLPBS中注射到腹膜腔中。 24小时灭活Akt。 为了检查PI3K抑制剂的作用，在接种癌细胞后立即用1.0,0.5或0.25mg / kg /天的渥曼青霉素或载体（PBS +二甲基亚砜）腹膜内处理小鼠。治疗持续连续20天。 二十天后，处死小鼠并检查腹膜转移性肿瘤的体重，腹水，数量和总重量。 超过相同年龄（数周）的正常裸鼠的肠系膜和更大网膜的平均重量的重量被认为是转移性肿瘤的净重，以便最小化血液或组织的混合。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
