3-TYP是SIRT3抑制剂

　　3-TYP 是一种选择性的 SIRT3 抑制剂，IC50 值为 16 nM, 比对 SIRT1 和 SIRT2 的选择性强，IC50 值分别为 88 nM 和 92 nM。

 

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　　生物活性

 

　　在体外

 

　　typ抑制褪黑素增强的SIRT3活性，但不影响SIRT3蛋白表达。3-TYP预处理逆转了褪黑素对镉（Cd）诱导的线粒体衍生O2?-生成和自噬细胞死亡的保护作用。3-TYP显著降低了褪黑素诱导的cd暴露的HepG2细胞中去乙酰化SOD2表达和SOD2活性的增加。

 

　　体内

 

　　与假手术组相比，3-TYP （50 mg/kg, i.p）对LVEF、LVFS、梗死灶大小、血清LDH水平、细胞凋亡和氧化应激无显著影响。此外，与Sham组相比，3-TYP对gp91phox、Nrf2、NQO 1、Bax、Bcl-2、Caspase-3和cleaved Caspase-3表达水平影响不大。与对照组相比，3-TYP显著降低SIRT3活性，增加SOD2乙酰化，但不影响SIRT3表达。3-TYP通过降低再灌注24小时后的LVEF和LVFS来减弱褪黑素的心脏保护作用。与IR+Mel组[2]相比，3-TYP也增加了梗死面积、血清LDH水平和凋亡率。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　使用Cell Counting Kit-8分析细胞活力。简单地说，接种1×104细胞到96孔板中。处理后，每孔分别加入介质90°L和CCK-8溶液10°L。然后细胞在37℃孵育2小时。孵育后，使用Infinite?M200酶标仪测定450 nm处的吸收。结果以控制的百分比表示。细胞死亡也用台盼蓝法进行评估。将HepG2细胞置于6孔板（每孔5×105个细胞）中孵育24小时，用Cd或褪黑素处理后，用300支点的胰蛋白酶- edta溶液分离细胞。将分离后的细胞以300 g离心5 min，将残留的细胞与800色丽台盼蓝溶液混合分散。染色3分钟后，用自动细胞计数仪计数细胞。死细胞被染成蓝色。细胞死亡率（%）表示为死亡细胞数/总细胞数的百分比。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。这些资料仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　简而言之，雄性C57BL/6小鼠使用2%异氟醚麻醉，通过左胸切口暂时将心脏外置，并在左冠状动脉前降支周围放置6-0丝线结，造成心肌缺血。心肌缺血30分钟后，松开活结，再灌注心肌3小时（用于western blot分析和氧化应激测量）或24小时（用于心功能、凋亡指数和梗死大小测定）。假手术的小鼠除了左冠状动脉下的缝合线不系结外，也接受同样的手术程序。再灌注前10分钟，小鼠随机接受溶剂（1%乙醇）或褪黑素（20 mg/kg）腹腔注射。C57BL/6小鼠随机分为：假手术组：假手术小鼠，1%乙醇溶液处理；（ii） Mel组：小鼠给予褪黑素（20 mg/kg腹腔注射）；（iii） IR+V组：小鼠接受MI/R手术，注入1%乙醇；（iv） IR+Mel组：小鼠行MI/R手术，再灌注前10分钟腹腔注射褪黑素20 mg/kg;（v）红外+蜂蜜+ 3-TYP组：老鼠是使用3-TYP （3-TYP腹腔内注射的剂量50毫克/公斤每2天前共有三个剂量MI / R手术），受到MI / R操作，和治疗与褪黑激素（20毫克/公斤通过腹腔内注射10分钟再灌注之前）；（vi） IR+3-TYP组：先用3-TYP预处理小鼠，再进行MI/R手术。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。这些资料仅供参考。