α-Amanitin抑制剂

　　alpha-Amanitin是几种致命毒蘑菇的主要毒素，通过抑制RNA聚合酶II发挥其毒性作用。

 

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　　生物活性

 

　　体外活性

 

　　Alman-Amanitin降低MKN45细胞中TAF15 mRNA和TAF15蛋白水平，并抑制针对TAF15 mRNA的RNAPII活性[2]。当浓度分别为100、10、1、0.1和0.01 ?g / mL时，α-Amanitin可使细胞活力分别降低14％，21％，41％，44％和50％。LD50在36 h时测得的α-天麻素含量为1 ?g / mL。与对照组相比，以1 ?g / mL剂量的α-Amanitin，细胞在24小时内的蛋白质总量显着增加[3]。Alman-Amanitin大大降低卵丘细胞中间隙连接基因（Gja1，Gja4和Gjc1）以及FSHr和LHr的表达[4]。

 

　　体内活性

 

　　静脉输液50静脉注射到BALB / c小鼠体内后，α-Amanitin的剂量为0.327 mg / kg体重。在尾静脉注射α-Amanitin12小时后，血清中白细胞，红细胞和血红蛋白的水平显着下降，而白细胞尿素和尿素的水平显着上升。α-天冬氨酸抑制某些基因（Hsp90b1，Irx4等），其编码的蛋白质调节RNA聚合酶II的活性。alpha-Amanitin下调参与转录过程的某些蛋白质（Nmi，Trpc5等）[1]。α-天麻素具有抑制DTC的有效活性。注射了经α-Amanitin（0.4 mg / kg，腹膜内）处理的细胞的小鼠保持体重，而接受腹膜注射MKN45细胞的小鼠显示体重持续下降[2]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　MTT测定法用于评估培养细胞的整体功能完整性和生存力。将MCF-7细胞放入96孔板（2×104对于每个孔），将其孵育24小时。将特定浓度的α-甘露糖素和β-甘露糖素添加到细胞培养基中，并将平板再孵育36小时。然后将MTT溶液（1:10的比例）和二甲基亚砜（DMSO）（100 ?L）添加到细胞培养基中，并将板孵育过夜。在酶标仪上于570 nm处测量吸光度。重复该实验3次。吸光度数据根据对照组计算为百分比。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　为了进行致癌性测试，分别将六个MBCN45细胞的菌落（未经处理）和DTC分别皮下注射到六只6周龄雌性裸鼠（BALB / cAjcl-nu / nu）的背部左侧和右侧。接种后49天或直到肿瘤最大直径达到10 mm为止，对这些小鼠进行监测，然后对其实施安乐死。对于PC型号，1.0×106将MKN45细胞腹膜内注射到六只6周龄的雌性裸鼠（BALB / cAjcl-nu / nu）中。然后用CIS（4.0mg / kg，腹膜内给药）或CIS和α-天冬酰胺的组合（0.4mg / kg，腹膜内给药）治疗小鼠。对于联合治疗，应在CIS前24小时给予α-天麻素。治疗后28天监测体重。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。