Lenalidomide来那度胺

　　来那度胺（CC-5013）是Thalidomide的衍生物，也是一种具有口服活性免疫调节剂。来那度胺（CC-5013）是一种泛素E3连接酶cereblon（CRBN）的配体，可通过CRBN-CRL4泛来那度胺（CC-5013）特别地抑制成熟B细胞淋巴瘤（包括多发性微小瘤）的生长，并诱导T细胞释放白细胞介素-2（IL-2）。

 

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　　生物活性

 

　　Lenalidomide的体外活性

 

　　来那度胺可有效刺激T细胞增殖以及IFN-γ和IL-2的产生。来那度胺已显示抑制促炎细胞因子TNF-α，IL-1，IL-6，IL-12的产生，并提高人PBMC的抗炎细胞因子IL-10的产生。来那度胺直接下调IL-6的产生，也抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞和骨髓基质细胞（BMSC）的相互作用，从而增加骨髓瘤细胞的凋亡。沙利度胺，来那度胺和泊马利度胺通过IC观察到与CRBN-DDB1复合物的剂量依赖性相互作用50 这些值分别降低了？30μM，？3μM和？3μM，这些CRBN表达细胞减少了（U266-CRBN60 和U266-CRBN75）在0.01至10μM的剂量反应范围内，对母体细胞对来那度胺的抗增殖作用的反应性低于亲代细胞。来那度胺类似物来那度胺是人E3泛素连接酶大脑和CKIα之间的分子胶，据显示可诱导该激酶的泛素化和降解，因此推测是通过p53激活杀死白血病细胞。

 

　　Lenalidomide的体内活性

 

　　通过静脉内，腹膜内和口服给药，来那度胺的毒性高达15、22.5和45 mg / kg。受在我们的PBS给药媒介物中溶解度的限制，这些最大可得的来那度胺剂量耐受良好，除了在15 mg / kg静脉注射剂量下一只小鼠死亡（共四剂）死亡外。值得注意的是，在研究中，以15 mg / kg（n = 3）或10 mg / kg（n = 45）的IV剂量或通过IV，IP和PO途径的任何其他剂量水平均未观察到其他毒性。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　NCI-H929和U266细胞系以及DF15细胞在RPMI-I640培养基中生长，该培养基含有10％（V / V）热灭活的胎牛血清，并补充了2 mM谷氨酰胺。为了产生抗来那度胺的细胞系，将NCI-H929细胞连续进行处理（每3-4天加入新来那度胺），并用对照（最终0.1％DMSO）或小剂量来那度胺（1μM）处理2个月，直至细胞增殖如细胞活力（Vi-cell XR细胞活力分析仪），流式细胞仪和细胞周期分析（碘化丙啶染色）所测定，它不再被来那度胺（1μM）抑制。获得对1μM的抗性后，将抗性H929细胞系用来那度胺（10μM）处理再持续4个月。在这段时间之后，细胞培养物完全达到了对大剂量来那度胺（30μM）的抗性。在进行此处描述的实验之前，使用前先将H929来那度胺抗性细胞与化合物一起培养5-7天。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　老鼠

 

　　使用8-10周龄的 印迹对照区（ICR）小鼠。来那度胺在3.5 mg / mL或更高浓度的含1％HCl的PBS中不完全溶解，因为在充分混合后仍残留可见颗粒。因此，选择3 mg / mL作为最大定量溶液浓度（无可见颗粒）。最初给单个，单独的小鼠剂量分别为3、10 或15 mg / kg静脉注射；IP 4.5、15或22.5 mg / kg；和9、30或45 mg / kg PO。然后以来那度胺在给药溶液中的体积和溶解度可获得的最大剂量评估另外的小鼠（n = 4）。给药后3h，6h和24h密切监测所有小鼠的毒性并重新评估。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。