5-Azacytidine通过DNA甲基转移酶抑制DNA甲基化

    5-Azacytidine是胞苷的核苷类似物，其通过捕获 DNA甲基转移酶 特异性地抑制DNA甲基化。

 

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    5-Azacytidine的生物活性

 

    体外

 

    与各种基因相关的未甲基化的CpG岛在肿瘤中被部分或完全甲基化，并可以被5-氮杂胞苷重新激活。5-氮杂胞苷在相同浓度范围内可影响Friend红白血病细胞红系分化的弱诱导剂，影响DNA甲基转移酶活性。5-氮杂胞苷可抑制ID 50和ID 90值分别为0.019和0.15μg/ mL的L1210细胞。

 

    体内

 

    当动物暴露于5-Azacitidine（100 mg / kg，ip）2小时或更长时间时，TdR- 3 H的掺入被显着抑制。

 

    5氮杂胞苷的溶解

 

    体内：

 

    请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案，配制前请先配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂 (为保证实验结果的可靠性，体内实验的工作也建议您现用现配，当天使用；澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；以下溶剂前的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比)：

 

    1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》40％PEG300 》5％吐温80 》生理盐水45％

 

    溶解度：≥2.5 mg / mL（10.24 mM）; 清晰的解决方案

 

    2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》90％（盐水中20％SBE-β-CD）

 

    溶解度：≥2.5 mg / mL（10.24 mM）; 清晰的解决方案

 

    3、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》90％玉米油

 

    溶解度：≥2.5 mg / mL（10.24 mM）; 清晰的解决方案

 

    *以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    通过将细胞悬浮于给定体积的0.05mol / LTris-HCl缓冲液（pH 7.4）中，从培养的LI 210细胞中分离出粗制的无细胞提取物，并用Biosonik以70％最大输出的速度进行声提取30秒钟。在L型Spinco超速离心机中以105,000×g离心60分钟（4°C）后收集上清液。无细胞提取物的最终蛋白质浓度约为3 mg / mL。提取物被用作酶的来源。测量核糖核苷酸还原酶活性。酶的单位定义为以1mμmole/ hr的速率催化dCMP合成的量。用于测量嘧啶核苷（CR）和脱氧核苷（TdR，CdR）激酶的测定系统实质上是Chu和Fischer所描述的那些。但是，在沸水浴中加热2分钟可终止反应，根据Bach的方法分离磷酸化衍生物。将五十毫升等分试样加到1英寸的二乙基氨基乙基纸盘上，然后将其置于计数小瓶中，并用0.5 mL的0.5 mol / LPCA洗脱。1小时后，添加12 mL的Diotol，并测定放射性。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    将20mL细胞（大约1×10 4细胞/ mL）吸移到带有螺帽的无菌培养管中，并在37℃下孵育过夜。在添加1 mL代谢物（或培养基）之前，在给定时间段（0到240分钟）内添加1 mL 5-氮杂胞苷（5-azaCR）或培养基开始实验。每天两次通过Model A Coulter计数器测定细胞生长，持续3天。为了确定IDSO和ID90值，将5 mL L1210细胞（5×10 3细胞/ mL）与该药物在37°C下孵育3天，并确定细胞生长。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    对于体内实验，给白血病小鼠（大约1×10 3个细胞/动物）腹腔内注射0.2mL给定浓度的5-氮杂胞苷（5-azaCR）。2小时后，通过注入0.5 mL标记的代谢物（TdR- 3 H或UR- 3 H，10/μCi/12.5μg）开始反应。1小时后，通过颈椎骨折杀死动物（每组3只小鼠），并用肝素处理腹水，收集，合并，然后立即在800×g的Sorvall冷藏离心机R2C-B中以800×g离心10分钟（ 4°C）。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。