RG108是一种非核苷的DNA甲基转移酶抑制剂

    RG108 (N-Phthalyl-L-tryptophan) 是一种非核苷的 DNA 甲基转移酶 (DNMTs) 抑制剂 (IC50=115 nM)，RG108 (N-Phthalyl-L-tryptophan) 阻断 DNA 甲基转移酶的活性位点。RG108 (N-Phthalyl-L-tryptophan) 引起抑癌基因的去甲基化和再激活，但不影响着丝粒卫星序列的甲基化。

 

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    RG108的生物活性

 

    体外

 

    RG108在体外可有效阻断DNA甲基转移酶，并且不会在人细胞系中引起共价酶捕获。低微摩尔浓度RG108的细胞孵育会导致基因组DNA明显脱甲基，而没有任何可检测到的毒性。有趣的是，RG108会引起抑癌基因的去甲基化和再激活，但不会影响着丝粒卫星序列的甲基化。在另一项研究中，研究了生物素化的RG108共轭物的合成和体外分析，以评估与DNA甲基转移酶的相互作用。最近的研究表明，与天然SM相比，RG108可以显着降低SM衍生的iPS细胞中的DNA甲基转移酶活性。

 

    RG108的溶解度

 

    体内：

 

    请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案，配制前请先配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂 (为保证实验结果的可靠性，体内实验的工作也建议您现用现配，当天使用；澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；以下溶剂前的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比)：

 

    1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》40％PEG300 》5％吐温80 》生理盐水45％

 

    溶解度：≥2.5 mg / mL（7.48 mM）; 清晰的解决方案

 

    2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》90％（盐水中20％SBE-β-CD）

 

    溶解度：≥2.5 mg / mL（7.48 mM）; 清晰的解决方案

 

    3、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》90％玉米油

 

    溶解度：≥2.5 mg / mL（7.48 mM）; 清晰的解决方案

 

    *以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    用于体外甲基化测定的底物DNA是来自人p16Ink4a基因启动子区域的798 bp片段（相对于起始密码子为-423 / + 375）。甲基化反应包含350至400 ng的底物DNA和4单位的M.SssI甲基化酶（0.5μM），最终体积为50μL。添加抑制剂的终浓度分别为10、100、200和500μM。反应在37℃下进行2小时。完成后，将反应在65°C灭活15分钟，然后使用PCR Purification试剂盒纯化DNA。将300纳克的纯化DNA在60°C下用30单位的BstUI消化3小时，并在2％Tris-borate EDTA琼脂糖凝胶上进行分析。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。