GANT 61是Gli1和 Gli2抑制剂

    GANT 61 是靶向Hedgehog/GLi通路的 Gli1 和 Gli2 抑制剂。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    与靶向Smo（环巴胺）相比，GANT61（20μM）诱导更大的细胞死亡。GANT61（0、5、10、20μM）抑制人结肠癌细胞系的克隆形成存活。GANT61（20μM，0-72小时）下调HT29细胞中Gli1和Gli2的表达。GANT61（0、10μM或20μM）差异性调节参与细胞死亡和细胞存活之间平衡的基因[1]。GANT-61抑制细胞活力并诱导胰腺CSCs凋亡。GANT-61抑制Shh通路下游靶标的表达，降低胰腺CSC中的Gli-DNA相互作用，Gli转录活性和Gli核易位。GANT-61差异性调节参与细胞存活，细胞死亡和多能性的基因。GANT-61抑制CSC的运动，侵袭和迁移[2]。在所测试的神经母细胞瘤细胞系中，GANT61敏感性与GLI1正相关，与MYCN表达负相关。GANT61下调GLI1，c-MYC，MYCN和Cyclin D1的表达并诱导神经母细胞瘤细胞凋亡。

 

    体内

 

    GANT-61（40 mg / kg，腹膜内，每周三天）抑制NOD / SCIDIL2Rγ无效小鼠的CSC肿瘤生长[2]。GANT61（50 mg / kg，口服）以累加或协同方式增强用于治疗神经母细胞瘤的化学治疗药物的作用，并减少裸鼠中已建立的神经母细胞瘤异种移植物的生长。

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    将细胞（1.5×10 4）与96孔板中250μL培养基中的0、1、5和10μMGANT-61孵育48和72 h。细胞活力通过XTT测定法确定。简而言之，将新鲜制备的XTT-PMS标记混合物（50μL）添加到细胞培养物中。在450 nm处测量吸光度，并在650 nm处进行λ校正。细胞存活力表示为ΔOD（OD450-OD650）。通过碘化丙啶（PI）染色的细胞的FACS分析确定细胞凋亡。简而言之，将细胞用胰蛋白酶消化，用PBS洗涤，然后用10μLRNAase（10 mg / mL）重悬于200μLPBS中，并在37°C下孵育30分钟。孵育后，添加50μLPI溶液，并使用流式细胞仪分析细胞的凋亡。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    使用人源化的NOD / SCID / IL2Rgammanull小鼠进行分析。在注射CSC之前，将小鼠的正常人CD34 +  外周血干/祖细胞的尾静脉注射进行人源化。通过尾静脉注射CD34 +外周血干/祖细胞（500个细胞/小鼠，体积为50-75μL）。3天后，人胰腺CSC（1×10 3 将与Matrigel，Becton Dickinson，Bedford，MA混合的细胞按75 ?L总体积（50:50的比例）皮下注射到NOD / SCIDIL2Rγnull小鼠（4-6周龄）的腹侧。CSC植入两周后，每周对小鼠（每组10只小鼠）进行腹腔内GANT-61（0和40 mg / kg体重）处理3次，共6周。实验结束时，对小鼠实施安乐死，并分离肿瘤进行生化分析。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。