MCC950是NLR抑制剂

    MCC950 (CP-456773; CRID3) 是一种有效，选择性的 NLRP3 抑制剂，在BMDMs 和 HMDMs中的IC50 分别为 7.5 nM 和 8.1 nM。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    MCC950可以在纳摩尔浓度下阻断经典和非经典NLRP3激活。MCC950特别抑制NLRP3，但不抑制AIM2，NLRC4或NLRP1激活。在小鼠骨髓衍生的巨噬细胞（BMDM）和人单核细胞衍生的巨噬细胞（HMDM）中测试了MCC950对NLRP3炎性小体激活的影响。BMDM中MCC950 的IC 50约为7.5 nM，而HMDM中它具有相似的抑制能力（IC 50 = 8.1 nM）。MCC950还可以剂量依赖性地抑制IL-1β的分泌，但不能抑制TNF-α的分泌。MCC950在刺激非典型途径后特异性阻断caspase-11-定向的NLRP3激活和IL-1β的分泌。NLRC4刺激的IL-1β和TNF-α分泌（由鼠伤寒沙门氏菌激活）即使浓度为10 ?M，也不会被MCC950抑制。MCC950不会抑制鼠伤寒沙门氏菌引起的caspase-1激活或IL-1β加工。MCC950处理基本上不影响细胞裂解物中的前胱天蛋白酶-1和前IL-1β的表达。

 

    体内

 

    MCC950降低白细胞介素1p（IL-1β）的产生，并减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的严重程度，EAE是多发性硬化症的疾病模型。使用MCC950进行预处理可降低血清中IL-1β和IL-6的浓度，但不会显着降低TNF-α的含量。用MCC950治疗小鼠可延迟发作并降低EAE的严重程度。与在PBS处理的小鼠相比，在第22天处死的小鼠的脑单核细胞的细胞内细胞因子染色和FACS分析显示，在MCC950处理的小鼠中，IL-17和产生IFN-γ的CD3 + T细胞的频率适度降低。CD3 +的CD4 +和γδ +亚群中的IFN-γ尤其是产生IL-17的细胞数量也减少了T细胞

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    BMDM在5×10接种5 / mL或1×10 6 5×10 /毫升，HMDM 5 / mL和PBMC以2×10 6 / mL或5×10 6 / mL，在96个孔板中。第二天，更换过夜培养基，并用来自大肠杆菌的 10 ng / mL LPS刺激细胞血清型EH100（ra）TLRgrad 3小时。除去培养基，并用含有DMSO（1：1,000），MCC950（0.001-10 ?M），格列本脲（200 ?M），小白菊酯（10 ?M）或拜耳半胱氨酸白三烯受体拮抗剂1-（5-）的无血清培养基（SFM）代替。羧基-2 {3- [3- [4-（3-环己基丙氧基）苯基]丙氧基}苯甲酰基）哌啶-4-羧酸（40 ?M），持续30分钟。然后用炎性体激活剂刺激细胞：5 mM腺苷5'-三磷酸二钠二水合物（ATP）（1 h），1 ?g / mL聚（脱氧腺苷-胸苷）酸性钠盐（Poly dA：dT）转染Lipofectamine 200（ 3-4小时），200 ?g / mL MSU（过夜）和10 ?M尼日利亚霉素（1小时）或鼠伤寒沙门氏菌UK-1株。还用25 ?g / mL聚腺苷酸-多尿苷酸刺激细胞（4小时）。对于非典型的炎性体激活细胞，用100 ng / mL Pam3CSK4灌注细胞4 h，除去培养基并用含DMSO或MCC950的SFM代替，并用0.25％FuGENE转染2μg/ mL LPS 16 h。去除上清液，并使用ELISA试剂盒进行分析。使用CytoTox96非放射性细胞毒性测定法测量LDH释放。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠

 

    将 C150BL / 6小鼠皮下免疫150 ?g在含有4 mg / mL（0.4.mg/小鼠）热灭活的MTB的CFA中乳化的MOG肽35-55。在第0天和第2天腹腔内给小鼠注射500 ng百日咳毒素（PT：kaketsuken）。在疾病诱发的第0天，1天和2天以及之后每2天对小鼠腹腔注射MCC950（10 mg / kg）。在相同时间点向对照小鼠施用媒介物（PBS）。每天观察小鼠的疾病临床体征（无盲）。疾病严重度评分如下：无临床体征，0；tail尾，1；共济失调的步态，2; 后肢无力3 后肢瘫痪，4；和四瘫5。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。