AZ505抑制剂

    AZ505 ditrifluoroacetate 是一种有效，选择性的 SMYD2 抑制剂，IC50 为 0.12 μM。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    AZ505二三氟乙酸盐具有很高的选择性，并在亚微摩尔浓度下具有体外活性。AZ505二氟乙酸盐对SMYD2 的IC 50为0.12μM，是AZ505二氟乙酸盐对其他组蛋白甲基转移酶（如SMYD3（IC 50 > 83.3μM ），DOT1L（IC 50 > 83.3μM）的IC 50的600倍以上））和AZ505二三氟乙酸盐（IC 50 > 83.3μM ）[1]。AZ505二三氟乙酸盐是一种有效的选择性SMYD2抑制剂，IC 50为0.12μM。蛋白质赖氨酸甲基转移酶的人SMYD（含SET和MYND结构域的蛋白质）家族包含五个成员（SMYD1-5）。此外，AZ505二三氟乙酸酯不能抑制一组蛋白质赖氨酸甲基转移酶的酶促活性。提名AZ505二三氟乙酸盐用于ITC结合研究，K d为0.5μM。相反，针对p53底物肽的计算的K d为3.7μM。AZ505与SMYD2的二三氟乙酸盐结合主要是由熵驱动的，这通常表明结合是由疏水相互作用与少量氢键介导的。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    SMYD2在昆虫细胞中表达并纯化。AlphaScreen技术用于筛选我们的化学文库中的SMYD2小分子抑制剂。在室温下，使用1.25 nM SMYD2蛋白，200 nM SAM和100 nM生物素化的TDT缓冲液（50 mM Tris-HCl [pH 9.0]，2 mM DTT和0.01％Tween 20）进行甲基化（12μL）反应小体积384孔板中的p53肽底物（生物素-氨基己酰基-GSRAHSSHLKSKKGQSTSRH）。孵育75分钟后，通过加入5μL检测溶液（20 mM HEPES [pH 7.4]，1.7 mg / mL BSA，340 mM NaCl，680μMSAH，0.04 mg / mL链霉亲和素包被的AlphaScreen淬灭反应供体，蛋白A包被的受体珠）和1 nM的定制p53K370me1多克隆抗体。将反应板在黑暗中于室温下孵育过夜，并使用Envision 2101多标签读取器进行读取。将显示出对SMYD2的抑制作用> 50％的化合物用于浓度剂量反应测定，并对其进行人工分析。从30μM开始，以六个半对数稀释步骤选择了七个化合物浓度。除了不存在SMYD2蛋白和存在1 nM甲基化的p53肽外，伪像测定条件与SMYD2酶活性测定条件相同。我知道了 除了不存在SMYD2蛋白和存在1 nM甲基化的p53肽外。我知道了 除了不存在SMYD2蛋白和存在1 nM甲基化的p53肽外。我知道了使用内部软件从剂量反应数据计算出50个值。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。