LDN193189是ALK2/3抑制剂
2019-11-14 
MCE小分子
LDN193189 是一种选择性的 BMP I 型受体抑制剂，抑制 ALK2 和 ALK3 的 IC50 分别为 5 nM 和 30 nM。对 ALK4，ALK5 和 ALK7 的作用效果弱 (IC50≥500 nM)。
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生物活性
体外
LDN193189抑制BMP4介导的Smad1，Smad5和Smad8激活的作用比背索吗啡要强（IC 50 = 5 nM对470 nM），同时保留了BMP信号传导相对于TGF-β信号传导的200倍选择性（IC 50对于TGF-β≥1,000 nM）。LDN193189有效地抑制BMP的转录活性的I型受体ALK2和ALK3（IC 50 = 5nm至30nm时，分别地）和TGF-β的I型受体ALK4，ALK5和ALK7（IC 50 ≥5001nM）和选择性的增加与母体化合物相比，BMP信号转导与AMP激活的蛋白激酶，PDGFR和MAPK信号转导通路有关。LDN-193189阻断组成性活性ALK2 R206H或ALK2 Q207D诱导的转录活性突变蛋白。这些发现表明，LDN193189可能影响BMP诱导的成骨细胞分化。事实上，即使当12小时后BMP刺激施用LDN193189抑制碱性磷酸酶活性的C2C12细胞中通过BMP4诱导，这表明需要用于成骨细胞分化持续BMP信号传导活性
体内
在第一个实验中，在植入后7天肿瘤可触及后，每天两次腹膜内注射LDN193189（3 mg / kg）。在用对照载体和用LDN193189治疗的小鼠之间的生长速率在最初的5周后没有显着差异，但是在治疗后6周和7周后检测到生长速率的差异。在第二个实验中，从PCa-118b肿瘤中分离细胞并将其皮下注射到SCID小鼠中（1×10 6每个小鼠的细胞数）。将LDN193189或媒介物在肿瘤细胞注射后5天施用于小鼠，然后才可触摸到肿瘤。两组之间的平均生长率差异（以肿瘤大小衡量）在治疗后6周和7周时显着。在研究结束的第7周，肿瘤的重量也显示出显着差异。肿瘤的X射线显示，与对照组相比，LDN193189治疗组的肿瘤异位骨体积和骨密度降低了]。将UK-92480和LDN193189与来自肺动脉高压（PAH）大鼠的肺动脉平滑肌细胞（PASMC）共同孵育，可以完全抑制骨形态发生蛋白（BMPR2）和Cx40表达的抗增殖和上调作用。 UK-92480.
实验参考方法
细胞分析
用0.3μgId1启动子荧光素酶报告基因构建体（BRE-Luc）与0.6μg表达BMP I型受体组成型活性形式的质粒（caALK2，caALK3或caALK6）在六孔板中瞬时转染生长的小鼠PASMCs至50％融合。对于两种报告质粒，都使用0.2μgpRL-TK 海肾荧光素酶来控制转染效率。转染后1小时，将PASMC与LDN193189（2 nM-32μM）或溶媒孵育。收获细胞提取物，并用双重荧光素酶测定试剂盒通过萤火虫与海肾荧光素酶活性之比来定量相对启动子活性。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
老鼠
在第一个实验中，SCID小鼠植入了MDA-PCa-118b肿瘤。当肿瘤达到可测量的大小7天后，每天两次给小鼠注射LDN193189（3 mg / kg）或腹膜内注射媒介物。每周测量一次肿瘤大小和体重。在处死前三天和一天给小鼠注射钙黄绿素。收集血液并称重肿瘤。使用EVS CT将一部分肿瘤固定在甲醛中进行微型计算机断层扫描（microCT），或使用OsteoMeasure Analysis System将其进一步脱钙以进行骨组织形态分析，或快速冷冻进行RNA制备。通过ELISA测定小鼠血清中的骨钙素。在第二个实验中，首先用Accumax消化PCa-118b肿瘤，然后将分离的细胞铺板过夜，以1：1比例重悬于基质胶中，皮下注射6个细胞/小鼠）。注射后五天用LDN193189治疗小鼠。
大鼠
8周龄的雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠体重200-220 g，购自南京医科大学动物中心。将大鼠随机分配至七个实验组之一（每组n = 6）。在自然的12/12小时昼/夜循环中，老鼠可以自由进食和饮水。通过向背部皮下注射向大鼠施用Monocrotaline（60 mg / kg）。进行血流动力学评估后，在研究的第28天收获动物的肺。UK-92480组在给予MCT（60 mg / kg）后每天接受UK-92480的胃内给药。LDN193189组每天接受UK-92480（50 mg / kg）的胃内给药和LDN193189（10 mg / kg）的腹膜内注射。在其他组中，给予相同体积的盐水。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
