Z-DEVD-FMK

    Z-DEVD-FMK 是一种特异性的不可逆的 caspase-3 抑制剂，IC50 为 18 μM。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    在不存在或存在50μMZ-DIPD-FMK或100μMZ-DEVD-FMK或50μMZ-LEHD-FMK的情况下，将N27细胞暴露于MPP +下，然后通过以下方法确定caspase-9和caspase-3的酶活性分别在暴露后12和24小时进行酶促测定。在N27细胞中暴露于300μMMPP + 24小时会导致caspase-3酶活性增加约2.5倍。MPP +诱导的caspase-3酶活性增加被50μMZ-DIPD-FMK，100μMZ-DEVD-FMK和50μMZ-LEHD-FMK显着抑制。

 

    体内

 

    早期Z-DEVD-FMK（160 ng）治疗可改善小鼠严重控制皮层撞击（CCI）所致的中枢神经系统损伤后的运动和认知功能[2]。与用DMSO媒介物治疗的受创伤动物相比，用Z-DEVD-FMK（160 ng）治疗可显着改善神经系统结局（p <0.01）

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    N27细胞和原脑神经元暴露于10-100μM6-OHDA或10-300μMMPP +在0.1-50μMZ-DIPD-FMK或0.1-100μMZ-DEVD-FMK或存在或不存在在实验过程中，使用50μMZ-IETD-FMK或Z-LEHD-FMK。在存在或不存在50μMZ-DEVD-FMK的情况下，将N27细胞与100μM6-OHDA孵育24 h或300μMMPP +孵育36 h，并通过MTT分析确定细胞死亡，该方法广泛用于评估细胞可行性。处理后，将细胞在含有0.25 mg / mL MTT的无血清培养基中于37°C孵育3小时。使用SpectraMax酶标仪在570 nm和630 nm的参考波长下测量了由四唑鎓形成的甲maz 。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠[2]使用

 

    雄性C57Bl / 6小鼠（20-25g）。为了在CCI后使用Z-DEVD-fmk或媒介物进行治疗，将小鼠在受伤后的不同时间用异氟烷重新麻醉，放置在立体定位仪中，并重新打开CCI伤口进行脑室内注射。在5分钟内注入Z-DEVD-FMK（在2μLDMSO中为160 ng）或DMSO载体。

 

    大鼠

 

    使用雄性Sprague Dawley大鼠（425±25g）。DMSO（5μL）载体或Z-DEVD-FMK（160 ng在5μLDMSO中）在TBI之前，30分钟以及之后6和24小时通过输液泵以0.5μL/ min的受控速率给药。在受伤后的指定时间段内，在戊巴比妥钠麻醉下（100 mg / kg，腹腔注射）将动物断头，并迅速取出大脑并解剖。假手术（对照）动物接受了麻醉和手术，但没有受到创伤。TBI后1、4、12、24和72小时收集组织样本。将样品在干冰上冷冻并保持在-85°C。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。