AZD6244高效的MEK抑制剂
2019-03-14 
MCE小分子
azd6244是一种高效的 MEK 抑制剂， 抑制MEK1的 IC50 为14 nM。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务的
AZD6244的生物活性研究
体外
azd6244引起原发性DNA合成和细胞活力的时间和剂量依赖性降低，诱导与原代2-1318细胞中ERK失活相关的生长停滞和凋亡。 Selumetinib（1μM）通过G0 / G1阻滞对H-441，H-1437细胞显示出抗增殖作用。 Selumetinib（ARRY-142886）导致几种含有B-Raf和Ras突变的细胞系的生长抑制，但对正常成纤维细胞系没有影响。
体内
Selumetinib（AZD6244,50和100mg / kg，口服）以剂量依赖性方式降低4-1318异种移植物的生长速率; 当以50mg / kg的剂量给予时，AZD6244也显着抑制5-1318,2-1318,26-1004和29-1104异种移植物的生长。 Selumetinib（ARRY-142886,10,25,50或100mg / kg，口服）能够抑制裸鼠中ERK1 / 2磷酸化和HT-29异种移植肿瘤的生长。 肿瘤消退也见于BxPC3异种移植模型
AZD6244的实验参考方法
激酶测定
通过测量来自[γ-33P] ATP的[γ-33P]磷酸盐掺入ERK2来评估MEK1的活性。 该试验在96孔聚丙烯板中进行，培养混合物（100μL）由25mM HEPES（pH7.4），10mMMgCl2,5mMβ-甘油磷酸盐，100μM原钒酸钠，5mM DTT，5组成。 nMMEK1,1μMERK2和0至80nM selumetinib（终浓度为1％DMSO）。 通过添加10μMATP（具有0.5μCk[γ-33P] ATP /孔）引发反应，并在室温下孵育45分钟。 加入等体积的25％三氯乙酸以终止反应并沉淀蛋白质。 将沉淀的蛋白质捕获到玻璃纤维B滤板上，用0.5％磷酸洗去过量的标记的ATP，并在液体闪烁计数器中计数放射性。 通过改变反应混合物中ATP的量来确定ATP依赖性。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
将原代HCC细胞以每孔2.0×104的密度接种在生长培养基中。 在生长培养基中48小时后，用MEM冲洗细胞单层两次。 用各种浓度的Selumetinib（AZD6244,0,0.5,1.0,2.0,3.0和4.0μM）处理细胞24或48小时。 通过MTT测定确定细胞活力。 如制造商所述，使用溴脱氧尿苷试剂盒测定细胞增殖。 实验至少重复三次，数据表示为平均值±SE。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
为了研究Selumetinib（AZD6244）对HCC异种移植物的作用，将AZD6244以适当的浓度悬浮于水中。 携带HCC异种移植物的小鼠是p.o. 从肿瘤后第7天开始，给予，每天两次，每公斤体重100μL水（n = 12）或50 mg（n = 12）或100 mg（n = 12）AZD6244每公斤体重21天 植入。 通过游标卡尺测量肿瘤的长度（a）和宽度（b），每周至少监测已建立的肿瘤异种移植物的生长。 肿瘤体积计算为（a×b2）/ 2。 在最后一剂ADZ6244后3小时处死动物，记录体重和肿瘤重量，收集肿瘤用于分析。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务的
AZD6244的生物活性研究
体外
azd6244引起原发性DNA合成和细胞活力的时间和剂量依赖性降低，诱导与原代2-1318细胞中ERK失活相关的生长停滞和凋亡。 Selumetinib（1μM）通过G0 / G1阻滞对H-441，H-1437细胞显示出抗增殖作用。 Selumetinib（ARRY-142886）导致几种含有B-Raf和Ras突变的细胞系的生长抑制，但对正常成纤维细胞系没有影响。
体内
Selumetinib（AZD6244,50和100mg / kg，口服）以剂量依赖性方式降低4-1318异种移植物的生长速率; 当以50mg / kg的剂量给予时，AZD6244也显着抑制5-1318,2-1318,26-1004和29-1104异种移植物的生长。 Selumetinib（ARRY-142886,10,25,50或100mg / kg，口服）能够抑制裸鼠中ERK1 / 2磷酸化和HT-29异种移植肿瘤的生长。 肿瘤消退也见于BxPC3异种移植模型
AZD6244的实验参考方法
激酶测定
通过测量来自[γ-33P] ATP的[γ-33P]磷酸盐掺入ERK2来评估MEK1的活性。 该试验在96孔聚丙烯板中进行，培养混合物（100μL）由25mM HEPES（pH7.4），10mMMgCl2,5mMβ-甘油磷酸盐，100μM原钒酸钠，5mM DTT，5组成。 nMMEK1,1μMERK2和0至80nM selumetinib（终浓度为1％DMSO）。 通过添加10μMATP（具有0.5μCk[γ-33P] ATP /孔）引发反应，并在室温下孵育45分钟。 加入等体积的25％三氯乙酸以终止反应并沉淀蛋白质。 将沉淀的蛋白质捕获到玻璃纤维B滤板上，用0.5％磷酸洗去过量的标记的ATP，并在液体闪烁计数器中计数放射性。 通过改变反应混合物中ATP的量来确定ATP依赖性。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
将原代HCC细胞以每孔2.0×104的密度接种在生长培养基中。 在生长培养基中48小时后，用MEM冲洗细胞单层两次。 用各种浓度的Selumetinib（AZD6244,0,0.5,1.0,2.0,3.0和4.0μM）处理细胞24或48小时。 通过MTT测定确定细胞活力。 如制造商所述，使用溴脱氧尿苷试剂盒测定细胞增殖。 实验至少重复三次，数据表示为平均值±SE。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
为了研究Selumetinib（AZD6244）对HCC异种移植物的作用，将AZD6244以适当的浓度悬浮于水中。 携带HCC异种移植物的小鼠是p.o. 从肿瘤后第7天开始，给予，每天两次，每公斤体重100μL水（n = 12）或50 mg（n = 12）或100 mg（n = 12）AZD6244每公斤体重21天 植入。 通过游标卡尺测量肿瘤的长度（a）和宽度（b），每周至少监测已建立的肿瘤异种移植物的生长。 肿瘤体积计算为（a×b2）/ 2。 在最后一剂ADZ6244后3小时处死动物，记录体重和肿瘤重量，收集肿瘤用于分析。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
