Gandotinib是JAK2抑制剂

    Gandotinib (LY2784544) 是一种有效的 JAK2 抑制剂，IC50 为 3 nM。Gandotinib (LY2784544) 也抑制FLT3，FLT4，FGFR2，TYK2 和 TRKB，IC50 分别为 4，25，32，44 和 95 nM。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    Gandotinib（LY2784544），一种有效的，选择性和ATP竞争性的janus激酶2（JAK2）酪氨酸激酶抑制剂。LY2784544有效抑制Ba / F3细胞中JAK2V617F驱动的信号传导和细胞增殖（IC 50分别为20和55nM ）。相比之下，Gandotinib（LY2784544）在抑制白细胞介素-3刺激的野生型JAK2介导的信号传导和细胞增殖方面的效力要小得多（分别为IC 50 = 1183和1309nM）。Gandotinib（LY2784544）有效抑制JAK2V617F信号传导（IC 50 = 20 nM），但显着地显示出针对IL-3激活的野生型JAK2信号传导的非常小的活性，IC 50为1183 nM。LY2784544抑制表达JAK2V617F的细胞的增殖（IC 50= 55nM）并且作为IL-3刺激的野生型JAK2表达Ba / F3细胞增殖的抑制剂（IC 50 = 1309nM）明显不太有效。Gandotinib（LY2784544）在基于细胞的TF-1 JAK2测定（IC 50 = 45 nM ）中是有效的，并且在NK-92 JAK3 / JAK1异二聚体测定（942nM）中具有所需的阈值选择性。

 

    在体内

 

    Gandotinib（LY2784544）有效抑制Ba / F3-JAK2V617F-GFP（绿色荧光蛋白）腹水肿瘤细胞（TED 50 = 12.7 mg / kg）中的STAT5磷酸化，并显着降低（P <0.05）Ba / F3-JAK2V617F-GFP肿瘤负荷在JAK2V617F诱导的MPN模型中（TED 50 = 13.7 mg / kg，每天两次

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    将表达JAK2V617F的Ba / F3细胞置于含有RPMI-1640的载体（DMSO）或Gandotinib（LY2784544）（浓度范围，0.001-20μM）（1×10 4细胞/ 96孔）中。除了添加IL-3（2ng / mL）之外，类似地处理表达野生型JAK2的Ba / F3细胞。孵育72小时后，通过加入Cell Titer 96 Aqueous One Solution Reagent（20μL/孔）评估细胞增殖。使用GraphPad Prism 4软件[1]计算抑制细胞增殖的IC 50。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    动物管理局

 

    小鼠

 

    通过测量小鼠腹水肿瘤模型中STAT5磷酸化的抑制来评估JAK2V617F信号传导的剂量和时间依赖性体内抑制。将Ba / F3-JAK2V617F-GFP细胞（1×10 7）植入严重联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠）的腹腔内，并使其发展成腹水肿瘤7天。对于剂量反应研究（6只动物/组），通过口服强饲法（2.5,5,10,20,40或80 mg / kg）给予甘多替尼（LY2784544）一次然后30分钟后，收集腹水肿瘤细胞，固定，用小鼠抗pSTAT5（pY694）Alexa Fluor 647（1:10稀释）孵育2小时，并通过流式细胞术分析。时间过程研究类似地进行，除了动物用20,40或80mg / kg的Gandotinib（LY2784544）治疗，并且在给药后以0.25-6h的预定间隔收集腹水肿瘤细胞。通过单因素方差分析和Dunnett检验（α= 0.05）分析数据。使用四参数逻辑曲线拟合程序分析剂量响应数据。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。