JAK抑制剂AG490的作用原理
2024-12-16 
MCE小分子
AG490是酪氨酸激酶抑制剂，其抑制EGFR，Stat-3 和 JAK2/3。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
AG490抑制剂的生物活性
体外
AG490通过选择性阻断JAK2来抑制Stat-3的活化。 AG490用于选择性抑制JAK / Stat-3活化。 在10μM的剂量下，Stat-3磷酸化降低> 95％并维持细胞活力。 剂量为10μM的AG490导致EGF刺激的A431细胞中pStat-3降低> 95％，对Stat-3质量没有影响。 AG490是JAK3 / STAT，JAK3 / AP-1和JAK3 / MAPK途径的有效抑制剂及其细胞后果。 AG490以剂量依赖性方式消除IL-2诱导的[3H]胸苷掺入，显示IC 50为25μM。 AG490有效抑制T细胞中IL-2介导的增殖，结果不同于先前的研究，该研究显示该药物诱导ALL细胞凋亡，同时对有丝分裂原刺激的正常T细胞的生长没有明显影响。
体内
AG490显着抑制1型糖尿病（T1D）的发展（p = 0.02，p = 0.005;在两个不同的时间点）。 用AG490（1mg /小鼠）对新诊断的糖尿病NOD小鼠进行单药治疗，显着导致治疗动物（n = 23）的疾病缓解，与绝对无能力相比（0％; 0/10，p = 0.003，Log-rank检验） ）停药后，DMSO和持续的血红素血症维持数月。 AG490（1-10μg）以剂量依赖性方式显着减弱?-角叉菜胶诱导的热痛觉过敏。 AG490还可减少机械痛觉过敏
AG490抑制剂的实验参考方法
细胞分析
使用CellTiter 96试剂盒进行比色细胞增殖测定。 简言之，将A431细胞接种在96孔板（2000个细胞/孔）中，并在补充有10％FCS的DMEM / HAM F-12中培养24小时。 将细胞在无血清培养基中孵育24小时。 将EGF（10ng / mL）加入所有孔中。 单独或组合加入Tyrphostin AG1478（0.25mM）和AG490（10mM），将培养物温育适当的时间。 吸出培养基并向每个孔中加入CellTiter 96 Aqueous One Solution Reagent（20μL）。 将板在37℃温育最多1小时，并使用96孔板读数器在490nm处记录吸光度。 对于单一试剂和组合研究，数据来源于至少三次独立实验（一式三份）。 测定Tyrphostin AG1478（EGFR抑制剂）和AG490（JAK / STAT抑制剂）的IC 50值。 使用Calucsyn软件程序[1]量化组合的生长抑制作用。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
小鼠
使用雌性NOD / LtJ，NOD.Scid和BALB / c小鼠。 通过i.p途径将一小瓶含有5mg AG490的化合物注射到5只小鼠（1mg /小鼠）中。 对照组在相同的方案和条件下接收相同体积的载体。
大鼠
使用总共28只雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300g）。 在?-角叉菜胶注射后48小时，在大鼠中进行实验。 在剂量反应研究中随机包括总共4组（n = 6）的大鼠。 第1组是载体对照，其接受100μL的i.pl. 在盐水中注射3.5％DMSO。 组2-4注射3种不同剂量的AG490（1,5或10μg）。 为了研究纳洛酮对AG490诱导的抗伤害感受的作用，观察到另一组大鼠（组5; n = 4）。 第5组与AG490（10μg）和纳洛酮（10μg）共同施用。 这些药物是i.pl. 体积为100μl。 如前所述，在处理后4小时观察到AG490的体内药理学作用。 因此，行为测试在治疗前（基线评估）和治疗后4小时进行。 首先，对大鼠进行热痛觉过敏试验; 10分钟后，对同一组大鼠进行爪压测试。 所有实验均在上午8:00至下午2:00之间进行。 减少昼夜变化的混杂影响，所有程序都以盲目的方式进行。
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AG490抑制剂的生物活性
体外
AG490通过选择性阻断JAK2来抑制Stat-3的活化。 AG490用于选择性抑制JAK / Stat-3活化。 在10μM的剂量下，Stat-3磷酸化降低> 95％并维持细胞活力。 剂量为10μM的AG490导致EGF刺激的A431细胞中pStat-3降低> 95％，对Stat-3质量没有影响。 AG490是JAK3 / STAT，JAK3 / AP-1和JAK3 / MAPK途径的有效抑制剂及其细胞后果。 AG490以剂量依赖性方式消除IL-2诱导的[3H]胸苷掺入，显示IC 50为25μM。 AG490有效抑制T细胞中IL-2介导的增殖，结果不同于先前的研究，该研究显示该药物诱导ALL细胞凋亡，同时对有丝分裂原刺激的正常T细胞的生长没有明显影响。
体内
AG490显着抑制1型糖尿病（T1D）的发展（p = 0.02，p = 0.005;在两个不同的时间点）。 用AG490（1mg /小鼠）对新诊断的糖尿病NOD小鼠进行单药治疗，显着导致治疗动物（n = 23）的疾病缓解，与绝对无能力相比（0％; 0/10，p = 0.003，Log-rank检验） ）停药后，DMSO和持续的血红素血症维持数月。 AG490（1-10μg）以剂量依赖性方式显着减弱?-角叉菜胶诱导的热痛觉过敏。 AG490还可减少机械痛觉过敏
AG490抑制剂的实验参考方法
细胞分析
使用CellTiter 96试剂盒进行比色细胞增殖测定。 简言之，将A431细胞接种在96孔板（2000个细胞/孔）中，并在补充有10％FCS的DMEM / HAM F-12中培养24小时。 将细胞在无血清培养基中孵育24小时。 将EGF（10ng / mL）加入所有孔中。 单独或组合加入Tyrphostin AG1478（0.25mM）和AG490（10mM），将培养物温育适当的时间。 吸出培养基并向每个孔中加入CellTiter 96 Aqueous One Solution Reagent（20μL）。 将板在37℃温育最多1小时，并使用96孔板读数器在490nm处记录吸光度。 对于单一试剂和组合研究，数据来源于至少三次独立实验（一式三份）。 测定Tyrphostin AG1478（EGFR抑制剂）和AG490（JAK / STAT抑制剂）的IC 50值。 使用Calucsyn软件程序[1]量化组合的生长抑制作用。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
小鼠
使用雌性NOD / LtJ，NOD.Scid和BALB / c小鼠。 通过i.p途径将一小瓶含有5mg AG490的化合物注射到5只小鼠（1mg /小鼠）中。 对照组在相同的方案和条件下接收相同体积的载体。
大鼠
使用总共28只雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300g）。 在?-角叉菜胶注射后48小时，在大鼠中进行实验。 在剂量反应研究中随机包括总共4组（n = 6）的大鼠。 第1组是载体对照，其接受100μL的i.pl. 在盐水中注射3.5％DMSO。 组2-4注射3种不同剂量的AG490（1,5或10μg）。 为了研究纳洛酮对AG490诱导的抗伤害感受的作用，观察到另一组大鼠（组5; n = 4）。 第5组与AG490（10μg）和纳洛酮（10μg）共同施用。 这些药物是i.pl. 体积为100μl。 如前所述，在处理后4小时观察到AG490的体内药理学作用。 因此，行为测试在治疗前（基线评估）和治疗后4小时进行。 首先，对大鼠进行热痛觉过敏试验; 10分钟后，对同一组大鼠进行爪压测试。 所有实验均在上午8:00至下午2:00之间进行。 减少昼夜变化的混杂影响，所有程序都以盲目的方式进行。
