塞卡替尼Saracatinib抑制剂

　　Saracatinib (AZD0530) 是一种有效的 Src 抑制剂，抑制 c-Src，Lck，c-YES，Lyn，Fyn，Fgr 和 Blk 的 IC50 值为 2.7-11 nM，对其他酪氨酸激酶具有选择性。

 

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　　塞卡替尼Saracatinib抑制剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Saracatinib (AZD0530)是一种口服Src抑制剂，在体外显示出有效的抗迁移和抗侵袭作用，并在小鼠膀胱癌模型中抑制转移。Saracatinib的抗增殖活性在不同细胞系之间存在差异(IC50为0.2 ~ 10 μM)。Saracatinib有效抑制Src3T3小鼠成纤维细胞的增殖，并在一系列含有内源性Src的人类癌细胞系中显示出可变的抗增殖活性。结果表明，Saracatinib对结肠癌、前列腺癌、肺癌、白血病等5种肿瘤细胞系的亚微磨牙生长有抑制作用，IC50值为0.2 ~ 0.7 μM。在3天的MTS细胞增殖实验中，Saracatinib抑制bcr - abl驱动的人白血病细胞系K562的增殖，IC50为0.22 μM。在微滴迁移实验中，Saracatinib以浓度依赖的方式降低了人肺癌A549细胞的迁移(IC50为0.14 μM)。

 

　　体内研究

 

　　Saracatinib (AZD0530)以剂量依赖的方式有效抑制小鼠和大鼠皮下移植的Src3T3成纤维细胞的增殖。在两种模型中，在剂量≥6mg /kg/天时，肿瘤生长均被显著抑制(小鼠抑制60%，大鼠抑制98%)，在所研究的最大剂量下，肿瘤生长被完全抑制(小鼠25 mg/kg/天抑制100%，大鼠10 mg/kg/天抑制100%)。相关推荐：Bafetinib是Bcr-Abl抑制剂

 

　　塞卡替尼Saracatinib抑制剂的实验参考方法

 

　　激酶试验

 

　　研究萨拉卡替尼抑制的可逆性和机制，使用全长活化的人Src进行连续，偶联试验。ATP和肽底物(Src II肽)浓度依次变化(ATP 40-1280 μM;Src II肽100-800 μM)，结合Saracatinib (0-30 nM)，在饱和浓度不变的底物(ATP 1.6 mM;Src II肽1.0 mM)。Saracatinib对失活Src(在酪氨酸527处磷酸化，而不是酪氨酸416处磷酸化)的结合亲和力使用BIAcore溶液抑制法测定。该实验遵循Saracatinib与固定化脲基喹唑啉之间的竞争结合以与Src结合。数据分析使用GraFit，版本5进行非加权非线性回归，并使用f检验来识别最合适的方程。

 

　　细胞试验

 

　　使用比色法5-溴-2 ' -脱氧尿苷(BrdU)细胞增殖ELISA试剂盒评估细胞增殖。简单地说，将细胞涂于96孔板(1.5×104 cells/well)上，第二天加入0.039-20 μM Saracatinib in DMSO(终浓度为0.5%)，孵育24小时。BrdU脉冲标记细胞2小时并固定。然后用所提供的溶液使细胞DNA变性，并与抗brdu过氧化物酶孵育90分钟。用磷酸盐缓冲盐水洗涤三次后，加入四甲基联苯胺底物溶液，在摇板器上孵育10-30分钟，直到690 nm处阳性对照吸光度约为1.5个吸光度单位。

 

　　动物实验方法

 

　　小鼠和大鼠

 

　　使用雌性胸腺小鼠(nu/nu)和大鼠(RH-rnu/rnu)。动物每天1次，单药或Saracatinib 6.25-50 mg/kg灌胃，持续10-91天。计算肿瘤生长抑制。为了进行药代动力学和药效学分析，动物被人宰杀并收集样本(血浆和肿瘤)。肿瘤样品用5体积的水均质，用氯仿提取。固相萃取后，采用高效液相色谱-串联质谱法对血浆和肿瘤样品进行萨拉卡替尼浓度分析。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考