Salubrinal
2019-03-29 
MCE小分子
Salubrinal是可渗透细胞，选择性的eIF2α去磷酸化抑制剂
生物活性
体外
Salubrinal是最近发现的PP1抑制剂，能够在各种模型系统中保护免受内质网（ER）应激，与蛋白酶体抑制剂强烈协同，可增强不同白血病细胞系的凋亡。 Salubrinal优先似乎靶向PP1 / GADD34复合物，Salubrinal有兴趣检查Salubrinal的效果是否也可以由该磷酸酶的另一种抑制剂重现。 为此目的，选择了斑in素，其毒性低于冈田酸，但也可阻断PP1（IC50 =1.7μM）活性。
体内
Salubrinal是一种合成化学物质，可抑制真核翻译起始因子2α（eIF2α）的去磷酸化。 Salubrinal显着抑制CAIA小鼠的爪子的炎症。 例如，第6天的临床评分为1.94±1.7（安慰剂）和0.31±0.6（Salubrinal）; 在第12天，4.63±3.4（安慰剂）和1.09±1.6（Salubrinal）。与临床评分一致，在Salubrinal治疗组中，爪的增厚也减少。 此外，Salubrinal将组织学评分从1.47±1.10（N = 16;安慰剂）降至0.59±0.64（N = 16; Salubrinal）（p = 0.01）
实验参考方法
激酶测定
磷酸酶活性是根据磷酸酶的免疫沉淀物确定的。 简而言之，用Salubrinal（20μM），PSI（10nM），两种药物或冈田酸（100nM）的组合处理2×106K562细胞18小时。 用PBS洗涤后，将细胞在冰上在PP1LB中裂解15分钟（用于测定PP1γ活性; 20mM Tris-HCl，pH 7.5,1％Triton X-100,10％甘油，132mM NaCl，罗氏完成） 蛋白酶抑制剂）或在RIPA（用于PP2A）中，补充罗氏完全蛋白酶抑制剂）。 将含有500μg（PP1γ）或300μg（PP2A）蛋白的细胞裂解物在4℃下与2-3μg适当的抗体一起免疫沉淀过夜，然后与蛋白A-Sepharose一起温育。 免疫沉淀物在裂解缓冲液中洗涤三次，然后重悬于磷酸酶测定缓冲液（PP2A：20mM Tris-HCl，pH7.5,0.1mM CaCl 2;PP1γ：50mM Tris HCl pH 7.0,0.2mM MnCl 2,0.1mM CaCl 2， 125μg/ mL BSA，0.05％吐温20），补充有100μM6,8-二氟-4-甲基 - 伞形酮磷酸酯（DiFMUP）。 使沉淀物在37℃下在Eppendorf Thermoshaker上与底物反应1小时，离心并在BioTek Lambda Fluoro 320酶标仪（360 nmex / 460 nmem）上测量DiFMU荧光。 磷酸酶活性以相对于对照（DMSO处理的细胞）的百分比变化给出。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
通过WST-1比色测定评估细胞活力。 在具有2×104K562细胞/孔的96孔板上进行测定，一式三份，Salubrinal浓度范围为5-75μM（总体积200μL，18小时）。 未处理的细胞作为阴性对照样品。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
小鼠
使用Balb / c雌性小鼠（~9周龄），通过在第0天静脉内注射2mg ArthritoMAb抗体混合物诱导CAIA，然后在第3天腹膜内注射100μgLPS。将小鼠随机分成安慰剂组。 和Salubrinal治疗组。 从第0天开始每天静脉内施用Salubrinal（2.0mg / kg），同时向安慰剂组施用溶剂（49.5％PEG 400和0.5％Tween 80的PBS溶液）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
生物活性
体外
Salubrinal是最近发现的PP1抑制剂，能够在各种模型系统中保护免受内质网（ER）应激，与蛋白酶体抑制剂强烈协同，可增强不同白血病细胞系的凋亡。 Salubrinal优先似乎靶向PP1 / GADD34复合物，Salubrinal有兴趣检查Salubrinal的效果是否也可以由该磷酸酶的另一种抑制剂重现。 为此目的，选择了斑in素，其毒性低于冈田酸，但也可阻断PP1（IC50 =1.7μM）活性。
体内
Salubrinal是一种合成化学物质，可抑制真核翻译起始因子2α（eIF2α）的去磷酸化。 Salubrinal显着抑制CAIA小鼠的爪子的炎症。 例如，第6天的临床评分为1.94±1.7（安慰剂）和0.31±0.6（Salubrinal）; 在第12天，4.63±3.4（安慰剂）和1.09±1.6（Salubrinal）。与临床评分一致，在Salubrinal治疗组中，爪的增厚也减少。 此外，Salubrinal将组织学评分从1.47±1.10（N = 16;安慰剂）降至0.59±0.64（N = 16; Salubrinal）（p = 0.01）
实验参考方法
激酶测定
磷酸酶活性是根据磷酸酶的免疫沉淀物确定的。 简而言之，用Salubrinal（20μM），PSI（10nM），两种药物或冈田酸（100nM）的组合处理2×106K562细胞18小时。 用PBS洗涤后，将细胞在冰上在PP1LB中裂解15分钟（用于测定PP1γ活性; 20mM Tris-HCl，pH 7.5,1％Triton X-100,10％甘油，132mM NaCl，罗氏完成） 蛋白酶抑制剂）或在RIPA（用于PP2A）中，补充罗氏完全蛋白酶抑制剂）。 将含有500μg（PP1γ）或300μg（PP2A）蛋白的细胞裂解物在4℃下与2-3μg适当的抗体一起免疫沉淀过夜，然后与蛋白A-Sepharose一起温育。 免疫沉淀物在裂解缓冲液中洗涤三次，然后重悬于磷酸酶测定缓冲液（PP2A：20mM Tris-HCl，pH7.5,0.1mM CaCl 2;PP1γ：50mM Tris HCl pH 7.0,0.2mM MnCl 2,0.1mM CaCl 2， 125μg/ mL BSA，0.05％吐温20），补充有100μM6,8-二氟-4-甲基 - 伞形酮磷酸酯（DiFMUP）。 使沉淀物在37℃下在Eppendorf Thermoshaker上与底物反应1小时，离心并在BioTek Lambda Fluoro 320酶标仪（360 nmex / 460 nmem）上测量DiFMU荧光。 磷酸酶活性以相对于对照（DMSO处理的细胞）的百分比变化给出。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
通过WST-1比色测定评估细胞活力。 在具有2×104K562细胞/孔的96孔板上进行测定，一式三份，Salubrinal浓度范围为5-75μM（总体积200μL，18小时）。 未处理的细胞作为阴性对照样品。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
小鼠
使用Balb / c雌性小鼠（~9周龄），通过在第0天静脉内注射2mg ArthritoMAb抗体混合物诱导CAIA，然后在第3天腹膜内注射100μgLPS。将小鼠随机分成安慰剂组。 和Salubrinal治疗组。 从第0天开始每天静脉内施用Salubrinal（2.0mg / kg），同时向安慰剂组施用溶剂（49.5％PEG 400和0.5％Tween 80的PBS溶液）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
