尼达尼布Nintedanib激酶抑制剂

　　Nintedanib (BIBF 1120) 是一种有效的三重血管激酶抑制剂，抑制 VEGFR1/2/3，FGFR1/2/3 和 PDGFRα/β 的 IC50 值分别为 34 nM/13 nM/13 nM，69 nM/37 nM/108 nM 和 59 nM/65 nM。

 

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　　Nintedanib的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Nintedanib (BIBF 1120)结合到激酶结构域氨基端叶和羧基端叶之间的间隙上的atp结合位点。在细胞实验中，Nintedanib (BIBF 1120)抑制PDGF-BB刺激的BRPs的增殖，EC50为79 nM。Nintedanib (BIBF 1120) (100 nM)在5%血清加PDGF-BB刺激后阻断MAPK的激活。Nintedanib (BIBF 1120)在人血管平滑肌细胞(HUASMC)中抑制PDGF-BB刺激的增殖，EC50为69 nM。

 

　　体内研究

 

　　Nintedanib尼达尼布(BIBF 1120) (25-100 mg/kg每日p.o)在所有肿瘤模型中都有高活性，包括在裸鼠和同基因大鼠肿瘤模型中生长的人类肿瘤异种移植物。这在3天后肿瘤灌注、5天后血管密度和血管完整性降低、生长严重抑制的磁共振成像中可见一斑。Nintedanib (BIBF 1120)可口服，在体内肿瘤模型中显示出令人鼓舞的疗效，同时耐受性良好。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　Nintedanib的实验参考方法

 

　　激酶试验

 

　　在25%的DMSO中进行BIBF1120的连续稀释，在存在或不存在的情况下测定酶活性。每个微量滴度板包含内部控制，如空白，最大反应，和历史参考化合物。所有的孵育都在室温下的旋转振动筛上进行。将BIBF1120稀释液各10 μL加入10 μL稀释后的激酶(0.8 μg/mL VEGFR2, 10 mM Tris pH 7.5, 2 mM EDTA, 2 mg/mL BSA)中，预孵育1小时。反应开始时，加入30 μL含有62.4 mM Tris pH 7.5、2.7 mM DTT、5.3 mM MnCl2、13.3 mM mg -acetate、0.42 mM ATP、0.83 mg/mL poly - glul - tyr(4:1)和1.7 μg/mL poly - glul - tyr(4:1)-生物素的底物混合物，培养1小时。加入50 μL 250 mM EDTA, 20 mM HEPES, pH 7.4停止反应。将90 μL的反应混合物转移到链霉亲和素板上，孵育1-2小时。用PBS洗涤三次后，加入PY20(建议用0.5 mg/mL标记抗体在DELFIA测定缓冲液中稀释1:2000)。过量的检测抗体通过三次DELFIA洗涤缓冲液去除。然后在多标签读取器上测量前10分钟，每孔用100 μL DELFIA增强液孵育。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。