Anlotinib
2019-03-28 
MCE小分子
Anlotinib (AL3818)是一种高度有效的VEGFR2选择性抑制剂，IC50小于1 nM。它在临床试验中具有广谱性抗肿瘤潜力
体外研究
Anlotinib可占据VEGFR酪氨酸激酶的ATP结合区域，相对于其他酪氨酸激酶，对VEGFR2的选择性和抑制活性较高（IC50<1 nM）。Anlotinib可抑制VEGFR2和VEGFR3，IC50分别为0.2 nM和0.7 nM。Anlotinib对VEGFR1的抑制活性较低，IC50为26.9 nM。anlotinib抑制PDGFR相关激酶c-Kit和PDGFRβ的IC50分别为14.8和115 nM。它对其他激酶，如c-Met, c-Src, EGFR和HER2具有较小的活性。Anlotinib以皮摩尔级别的浓度在HUVEC细胞中抑制VEGF诱导的信号通路和细胞增殖。然而，在体外肿瘤细胞中则需要微摩尔级别浓度的anlotinib来直接抑制其增殖。Anlotinib可显著地抑制HUVEC的迁移和小管生成，在体外还能抑制大鼠主动脉移植体的血管生长。
体内研究 在体内肿瘤组织中，Anlotinib可降低血管密度。在某些动物模型中，与sunitinib相比，每天口服一定剂量anlotinib具有更广泛和有效的抗肿瘤活性，在裸鼠中能引起肿瘤消退。在小鼠中，Anlotinib耐受良好，显著抑制其肿瘤生长的有效剂量（1.5-6 mg/kg）比其他TKI低。在体内，anlotinib对多种人源异种移植瘤如SW-620、SK-OV-3、SMMC-7721、Caki-1、U87MG、Calu-3等具有广泛的活性。在Sprague-Dawley大鼠和beagle dogs体内，口服anlotinib能快速地从胃肠道吸收。在大鼠中，其口服生物利用度约为23-45%，而在犬类中为47%-74%。Anlotinib在犬类和大鼠中，分布体积大。在大鼠中，在一些主要的组织器官如肺、肾、肝和心脏中具有较血浆中更高的暴露量，而在大脑中的暴露量与血浆中水平相当。在携瘤小鼠中，肿瘤组织中的anlotinib的浓度比血浆中的高2.4-2.6倍。在人类，anlotinib具有较长的半衰期（t1/2=96 ± 17 h），并呈浓度依赖性关系。在狗中，终末半衰期为22.8±11.0 h，比在大鼠中(5.1±1.6 h)长。这一差异可能与物种间总的血浆清除率差异相关。在人类血浆中，anlotinib主要与白蛋白、脂蛋白相结合
实验参考方法
激酶实验：
酶联免疫吸附测定：
使用ELISA测定了anlotinib对酪氨酸激酶的抑制活性。 在反应缓冲液（50mmol / L HEPES pH 7.4,50mmol / L MgCl 2,0.5mmol / L MnCl 2,0.2mmol / L Na 3 VO 4,1mmol / L DTT）中引发ATP与酪氨酸激酶的反应，并在37℃温育1小时。 在预先涂有20μg/ mL聚（Glu，Tyr）4：1的96孔板中37℃。 将板与PY99抗体孵育，然后与HRP缀合的抗小鼠IgG孵育。 在与邻苯二胺溶液反应，然后加入2N H 2 SO 4终止后，使用Synergy H4 Hybrid读数器在490nm处测量吸光度。
细胞实验：
细胞系：HUVEC，Mo7e，U-87MG和A431细胞
浓度：0-10μM
孵化时间：1.5小时
方法：
血清饥饿的HUVEC，Mo7e，U-87MG和A431细胞用不同浓度的试剂处理1.5小时，然后用血管内皮生长因子（VEGF; 20 ng / mL），干细胞因子-1（SCF-1）刺激 分别为2.5ng / mL，血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB; 10ng / mL）或表皮生长因子（EGF; 10ng / mL），持续10分钟。 用指定的抗体探测细胞裂解物
动物实验
动物模型：人结肠癌SW620异种移植模型（Balb / cA裸鼠，5-6周龄）
配方：生理盐水
剂量：0.75,1.5,3和6mg / kg
用药：口服
体外研究
Anlotinib可占据VEGFR酪氨酸激酶的ATP结合区域，相对于其他酪氨酸激酶，对VEGFR2的选择性和抑制活性较高（IC50<1 nM）。Anlotinib可抑制VEGFR2和VEGFR3，IC50分别为0.2 nM和0.7 nM。Anlotinib对VEGFR1的抑制活性较低，IC50为26.9 nM。anlotinib抑制PDGFR相关激酶c-Kit和PDGFRβ的IC50分别为14.8和115 nM。它对其他激酶，如c-Met, c-Src, EGFR和HER2具有较小的活性。Anlotinib以皮摩尔级别的浓度在HUVEC细胞中抑制VEGF诱导的信号通路和细胞增殖。然而，在体外肿瘤细胞中则需要微摩尔级别浓度的anlotinib来直接抑制其增殖。Anlotinib可显著地抑制HUVEC的迁移和小管生成，在体外还能抑制大鼠主动脉移植体的血管生长。
体内研究 在体内肿瘤组织中，Anlotinib可降低血管密度。在某些动物模型中，与sunitinib相比，每天口服一定剂量anlotinib具有更广泛和有效的抗肿瘤活性，在裸鼠中能引起肿瘤消退。在小鼠中，Anlotinib耐受良好，显著抑制其肿瘤生长的有效剂量（1.5-6 mg/kg）比其他TKI低。在体内，anlotinib对多种人源异种移植瘤如SW-620、SK-OV-3、SMMC-7721、Caki-1、U87MG、Calu-3等具有广泛的活性。在Sprague-Dawley大鼠和beagle dogs体内，口服anlotinib能快速地从胃肠道吸收。在大鼠中，其口服生物利用度约为23-45%，而在犬类中为47%-74%。Anlotinib在犬类和大鼠中，分布体积大。在大鼠中，在一些主要的组织器官如肺、肾、肝和心脏中具有较血浆中更高的暴露量，而在大脑中的暴露量与血浆中水平相当。在携瘤小鼠中，肿瘤组织中的anlotinib的浓度比血浆中的高2.4-2.6倍。在人类，anlotinib具有较长的半衰期（t1/2=96 ± 17 h），并呈浓度依赖性关系。在狗中，终末半衰期为22.8±11.0 h，比在大鼠中(5.1±1.6 h)长。这一差异可能与物种间总的血浆清除率差异相关。在人类血浆中，anlotinib主要与白蛋白、脂蛋白相结合
实验参考方法
激酶实验：
酶联免疫吸附测定：
使用ELISA测定了anlotinib对酪氨酸激酶的抑制活性。 在反应缓冲液（50mmol / L HEPES pH 7.4,50mmol / L MgCl 2,0.5mmol / L MnCl 2,0.2mmol / L Na 3 VO 4,1mmol / L DTT）中引发ATP与酪氨酸激酶的反应，并在37℃温育1小时。 在预先涂有20μg/ mL聚（Glu，Tyr）4：1的96孔板中37℃。 将板与PY99抗体孵育，然后与HRP缀合的抗小鼠IgG孵育。 在与邻苯二胺溶液反应，然后加入2N H 2 SO 4终止后，使用Synergy H4 Hybrid读数器在490nm处测量吸光度。
细胞实验：
细胞系：HUVEC，Mo7e，U-87MG和A431细胞
浓度：0-10μM
孵化时间：1.5小时
方法：
血清饥饿的HUVEC，Mo7e，U-87MG和A431细胞用不同浓度的试剂处理1.5小时，然后用血管内皮生长因子（VEGF; 20 ng / mL），干细胞因子-1（SCF-1）刺激 分别为2.5ng / mL，血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB; 10ng / mL）或表皮生长因子（EGF; 10ng / mL），持续10分钟。 用指定的抗体探测细胞裂解物
动物实验
动物模型：人结肠癌SW620异种移植模型（Balb / cA裸鼠，5-6周龄）
配方：生理盐水
剂量：0.75,1.5,3和6mg / kg
用药：口服
