JAK3/2/1抑制剂是托法替尼Tofacitinib
2023-06-05 
MCE
Tofacitinib是 JAK3/2/1 抑制剂，IC50 分别为1，20 和 112 nM。
MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务
我们将采用定制合成服务的方式为您快速提供所需产品和技术服务
生物活性
体外研究
Tofacitinib （CP-690550）柠檬酸盐在JAK3和JAK2上的潜在结合为2.2 nM和5 nM （Kd）。该报告包括Tofacitinib在Camk1 （Kd为5000 nM）、DCamkL3 （Kd为4.5 nM）、Mst2 （Kd为4300 nM）、Pkn1 （Kd为200 nM）、Rps6ka2 （kin . dom .2- c端）（Kd为1400 nM）、Rps6ka6 （kin . dom .2- c端）（Kd为1200 nM）、Snark （Kd为420 nM）、Tnk1 （Kd为640 nM）和Tyk2 （Kd为620 nM）上的其他结合。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
体内研究
与peg处理的对照小鼠相比，接受Tofacitinib处理的小鼠抗药物抗体（ADAs）的产生显著降低（初始免疫后5周，p<0.01, n=8）。ADAs在第28天最早被检测到。从第21天到第35天，对SS1P滴度的差异分别为1000至200倍。与SS1P相比，小鼠注射keyhole帽贝血青素（KLH）产生更快的抗体反应。然而，与对照组相比，给予Tofacitinib可降低抗klh滴度（第21天p<0.05，第28天p<0.01, n=5）。从第21天到第28天，滴度分别降低5000至250倍。根据以往的剂量-反应研究，选择每日剂量为6.2 mg/kg的Tofacitinib可提供80%的后肢体积抑制和血浆暴露，能够抑制JAK1和JAK3信号通路>4小时。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
实验参考方法
激酶试验
激酶活性是通过选择的激酶的竞争结合试验记录的，这些激酶融合到专有标签上。在测试化合物（如托法替尼）存在和不存在的情况下，测量激酶与固定的活性位点定向配体结合的量，为配体的结合提供了%的DMSO控制。在0和10之间的活度被选择用于Kd测定。树形图表示由内部的可视化工具PhyloChem生成。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
细胞试验
通过磁分离从健康供体获得的外周血单个核细胞（CD4+ MACS珠）富集人CD4+阳性细胞。CD4+细胞用板结合抗cd3和抗CD28抗体（各5 ug/mL）活化3天，然后在IL-2 （50 U/mL）存在下扩增4天。细胞在1% RPMI中过夜，并与托法替尼或DMSO对照在指定浓度（5 nM, 50 nM, 500 nM;所有制剂中DMSO浓度相等），然后用IL-2 （1000 u/mL）或IL-12 （100 ng/mL）活化15分钟。细胞（10×106/condition）在1% Triton-x裂解缓冲液中裂解，等量的细胞裂解液在NuPage Bis-Tris凝胶（4-12%梯度）中运行。蛋白质被转移到硝化纤维素膜上。使用奥德赛western blotting系统对指示抗体进行检测。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
动物实验
小鼠
雌性BALB/c小鼠（6-8周龄）。小鼠通过渗透泵给药（Alzet模型2004,0.25 μL/小时，28天），给药PEG300 （100 mg/mL）或单独给药（PEG300）。免疫前4天，对小鼠进行麻醉，并对其背部进行刮毛。在背部做一个1厘米的切口，形成一个皮下口袋并插入泵。用伤口夹将切口闭合。小鼠每周（i.p）注射SS1P重组免疫毒素（RIT;5 μg/只）；对照组小鼠单独注射生理盐水。每周在SS1P或载体免疫前抽取50 μL血液，获得血清样本。血清保存在- 80°C直到分析。
大鼠
佐剂诱导的关节炎（AIA）在雌性Lewis大鼠中诱导。大鼠根据后爪体积随机分配给托法替尼或载体治疗方案。治疗组每组7-8只大鼠，正常幼稚大鼠（每组n=4只）在开始治疗后4小时、4天或7天（分别为免疫后第16、20和23天）实施安乐死。托法替尼悬浮在0.5%甲基纤维素/0.025% Tween 20中进行体内研究。免疫后第16天开始每日口服一次载药或托法替尼（6.2 mg/kg），并持续到第23天。治疗开始后第4天和第7天（分别是免疫后第20天和第23天）重新评估爪体积。为了进行微计算机断层扫描（micro-CT）成像，以及爪子组织中抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色，在Lewis大鼠的单独队列中诱导AIA。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
