CDKs抑制剂(R)-Roscovitine

　　（R）-Roscovitine （Seliciclib） 是一种有效的，具有口服活性的，选择性的 CDKs 抑制剂，抑制 CDK5，Cdc2 和 CDK2 的 IC50 分别为0.2 μM，0.65 μM，0.7 μM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　（R）-Roscovitine（Seliciclib）对一些周期蛋白依赖性激酶表现出高效率和高选择性。用25种高纯度的激酶（包括蛋白激酶A、G和C亚型、肌球蛋白轻链激酶、酪蛋白激酶2、IR酪氨酸激酶、C -src、v-abl）研究Seliciclib的激酶特异性。大多数激酶未被（R）-Roscovitine显著抑制。仅Cdc2、Cdk2和Cdk5被显著抑制（IC50值分别为0.65、0.7和0.2 μM）。（R）-Roscovitine对Cdk4k和Cdk6的抑制作用较差（IC50>100 μM）。细胞外调节激酶erk1和erk2被抑制，IC50分别为34 μM和14 μM。（R）-Roscovitine抑制哺乳动物细胞系的增殖，IC50平均为16 μM。（R）-Roscovitine（Seliciclib）降低CDK5和p35水平，上调E-cadherin，下调Vimentin和Collagen IV。（R）-Roscovitine抑制高糖培养的NRK52E细胞的迁移和侵袭能力。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　与正常对照相比，（R）-Roscovitine（Seliciclib）下调磷酸化的ERK1/2和PPARγ，同时E-cadherin升高，而Vimentin和Collagen IV降低。相应的，（R）-Roscovitine减少糖尿病大鼠肾小管间质纤维化。（R）-Roscovitine可通过ERK1/2/PPARγ途径有效减少糖尿病大鼠的小管间质纤维化。（R）-Roscovitine（Seliciclib） （16.5 mg/kg）显著降低肿瘤生长速度，提高治疗小鼠的存活率。引人注目的是，（R）-Roscovitine治疗导致一只小鼠的肿瘤完全消失（25%）；此外，在治疗完成5个月后，该小鼠未发现肿瘤再生。用（R）-Roscovitine治疗的小鼠和对照组小鼠体重没有显著差异，两组之间的行为差异也可以忽略不计。这些结果表明（R）-Roscovitine可以有效地作为HPV+头颈癌的选择性肿瘤生长抑制剂。

 

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　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　使用大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）。CDK5抑制剂（R）-Roscovitine（Seliciclib） （Ros.;10 μM）和激活剂p35 （15 μM）， PPARγ激动剂BRL 49653 （Rosi.;50 nM），ERK1/2抑制剂U0126（50 nM）作用于NRK52E细胞。每组细胞处理72小时，然后收获用于进一步分析。

 

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　　动物实验

 

　　大鼠

 

　　雄性Sprague Dawley大鼠（6-8周龄）腹腔单次注射链脲佐菌素（65 mg/kg），稀释在0.1 M柠檬酸缓冲液pH 4.5（糖尿病）或柠檬酸缓冲液（非糖尿病）中。注射后3天在葡萄糖分析仪上使用葡萄糖氧化酶法测定血浆葡萄糖浓度。葡萄糖水平超过16.7 mM的大鼠被认为是糖尿病，因此被纳入研究。每周测量一次血糖水平。为了研究CDK5抑制对肾小管间质纤维化的影响，糖尿病大鼠每天腹腔注射Seliciclib （25 mg/kg）至牺牲。DMSO作为对照。

 

　　小鼠

 

　　将呈指数增长的UMSCC47细胞皮下注射到雌性裸鼠的骶骨区。每只小鼠用2×105细胞接种50%基质和50% PBS，体积为100 μL。肿瘤达到可测量的大小后，小鼠腹腔注射16.5 mg/kg剂量的Seliciclib或载体注射。监测体重、肿瘤生长和一般行为。每3天测量一次肿瘤体积。当肿瘤超过0.5cm3时，处死小鼠。

 

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