XL01126抑制剂

　　XL01126 是一种强效的 LRRK2 降解剂，DC50 分别为 14 nM （G2019S LRRK2） 和 32 nM （WT LRRK2）。XL01126 可透过血脑屏障，并作为降解探针，用于帕金森疾病的研究。XL01126 能在 LRRK2 的非催化和框架功能的研究中发挥作用。

 

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　　为大家推荐一篇发表在J. Am. Chem. Soc.上的文章，文章的通讯作者是来自英国邓迪大学的Alessio Ciulli和Dario R. Alessi，前者做的是靶向蛋白降解方面的研究，后者做的是LRRK2信号通路相关的研究。

 

　　首先，作者以一种可穿透血脑屏障的抑制剂HG-10-012-01为LRRK2原型配体，E3配体部分则选择了CRBN、cIAP和VHL的配体，将两部分通过linker连接后构建了第一代化合物库。通过WB检测LRRK2及其底物Rab10的Thr73磷酸化水平来评估抑制效果，作者初步筛选出了3种具有较好抑制作用的分子，发现它们的E3配体部分都是VHL配体。于是，作者以LRRK2配体、VHL配体和linker这3个模块为基础进行衍生与组合，得到了第二代化合物库。在针对第二代化合物库的筛选中，作者发现了2种活性非常高的化合物XL01126和XL01134，它们在33 nM下处理24 h就可以实现对LRRK2超过50%的降解，而时间依赖性降解实验又显示XL01126具有更快的降解速率。因此，作者确定了XL01126为最终的PROTAC分子。

 

　　对于PROTAC分子而言，该分子与靶蛋白和E3连接酶间三元复合的亲和力、协同性和稳定性是至关重要的。作者设计了一个BRET实验来表征各PROTAC分子诱导三元复合物的形成，结果表明XL01126拥有最高的复合物诱导能力，其协同性显著大于XL01134。随后，为了验证该分子的靶向性，作者对XL01126处理的细胞进行了全蛋白质组的定量分析，发现除了XL01126外还有一个脱靶蛋白PDE6D，作者根据已有的PDE6D的PROTAC分子推测XL01126与其warhead的相似性可能是导致脱靶效应产生的原因。

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　XL01126 （300 nM;4 h）通过与E3泛素连接酶配体VHL和靶蛋白LRRK2形成正合作三元配合物，表现出较强的降解性能。

 

　　XL01126 （10,30,100 nM;24 h）增加永生化小鼠胚胎成纤维细胞的自噬。

 

　　Xl01126 （10 μm;90分钟）Caco-2细胞显示高通透性。

 

　　Xl01126 （10 μm;0-60最小；每15分钟间隔梯度）在小鼠血浆、肝微粒体和肝细胞中表现出很高的稳定性。

 

　　XL01126体外药动学

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　Western Blot分析

 

　　细胞系：g2019s LRRK2 MEFs（小鼠胚胎成纤维细胞）

 

　　浓度：300 nM

 

　　潜伏期：4小时

 

　　结果：LRRK2 pSer935、Rab10 pThr73降低。