Baricitinib

　　Baricitinib （LY3009104; INCB028050） 是选择性，可口服的 JAK1 和 JAK2 抑制剂，IC50 分别为5.9 nM 和 5.7 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　在基于细胞的检测中，Baricitinib （INCB028050）被证明是JAK信号通路和功能的有效抑制剂。在PBMCs中，Baricitinib抑制il -6刺激的典型底物STAT3的磷酸化（pSTAT3）和随后的趋化因子MCP-1的产生，IC50值分别为44 nM和40 nM。在分离的naive t细胞中，INCB028050也能抑制IL-23刺激的pSTAT3 （IC50=20 nM）。重要的是，这种抑制抑制了Th17细胞产生的两种致病细胞因子（IL-17和IL-22），其IC50值为50 nM。Th17细胞是一种辅助T细胞的亚型，具有明显的炎症和致病特性。与之形成鲜明对比的是，结构相似但无效的JAK1/2抑制剂INCB027753和INCB029843在浓度高达10 μM[1]时对这些检测系统没有显著影响。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　与对照剂相比，Baricitinib （INCB028050）处理在处理2周时，在剂量为1 mg/kg时可抑制后爪体积的增加50%，在剂量为3或10 mg/kg时可抑制>的95%。由于在治疗第0天对有明显疾病迹象的动物进行基线足趾体积测量，因此在肿胀明显改善的动物中，>可能被100%抑制。经H&E染色评估，Baricitinib （0.7 mg/天）处理的小鼠与对照处理的小鼠相比，炎症反应显著减少，CD8浸润减少，MHC I类和II类表达减少。CD8+NKG2D+细胞是小鼠和人斑秃（AA）疾病的关键效应因子，与对照小鼠相比，Baricitinib治疗小鼠的CD8+NKG2D+细胞显著减少。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　为了测定il -6诱导的MCP-1的产生，PBMCs在RPMI 1640+10% FCS中每孔3.3×105 cell电镀，在不同浓度的INCB028050 （1 nM、10 nM、100 nM、1 μM和10 μM）存在或不存在的情况下进行。在室温下与复合物预孵育10分钟后，每孔加入10 ng/mL人重组IL-6刺激细胞。细胞在37°C, 5% CO2孵育48小时。收集上清液，用ELISA法分析人MCP-1的水平。据报道，INCB028050抑制il -6诱导的MCP-1分泌的能力为50%抑制所需的浓度（IC50）。使用Cell-Titer Glo[1]对Ba/F3-TEL-JAK3细胞进行3 d以上的增殖。

 

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　　动物实验

 

　　老鼠

 

　　雌性大鼠（每组性别n=6只）给予10 mg/kg的Baricitinib，并以10 mL/kg的剂量灌胃。前3只大鼠在给药前0、2、8、24 h放血，后3只大鼠在给药后1、4、12 h放血。用EDTA作为抗凝剂，样品离心获得血浆。已经开发了一种定量测定INCB028050的分析方法，并用于毒理学研究样品的分析。该方法结合了10%甲醇在乙腈中沉淀提取蛋白质和LC/MS/MS分析。该方法使用0.1 mL研究样品，在1-5000 nM范围内具有线性关系。使用分析师1.3.1处理数据。使用加权线性回归（1/x2）从峰面积比与浓度之间确定标准曲线。

 

　　老鼠

 

　　实验采用AA的C3H/HeJ移植受体小鼠模型。简单地说，将自发脱发的C3H/HeJ小鼠的脱发皮肤移植到8-10周无疾病的C3H/HeJ小鼠上。在移植时，植入一个渗透泵，给予约0.7 mg/天的Baricitinib或安慰剂。渗透泵每月更换一次。对间隔截尾数据进行了时间-事件生存分析。R中的生存和间隔包用于执行log-rank测试。（n=10） baricitinib治疗的小鼠和（n=10）安慰剂治疗的小鼠的生存分布相等的假设在5%水平上被拒绝，使用Sun的分数执行一个精确的log-rank - two-sample检验，p值为0.0035。

 

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