Ro 5126766 是 MEK/RAF 抑制剂

　　Ro 5126766 （CH5126766） 是一种有效的双重 MEK/RAF 抑制剂，抑制 BRAFV600E，CRAF, MEK，和 BRAF，IC50 分别为 8.2 nM, 56 nM, 160 nM 和 190 nM。

 

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　　生物活性

 

　　RO5126766 （RO5126766）是一种变构抑制剂，可直接与MEK结合，通过形成稳定的RAF-MEK复合物来阻止其被RAF磷酸化。ro5126766既能抑制RAF对MEK的磷酸化作用，也能抑制MEK对ERK的激活作用。在细胞游离MEK和RAF激酶检测中，Ro 5126766能有效抑制MEK1对ERK2的激活，IC50为160 nM （SD=±0.043），抑制BRAF （IC50=190 nM, SD=±0.003）、BRAFV600E （IC50=8.2 nM, SD=±0.0015）、CRAF （IC50=56 nM, SD=±0.016）对MEK1蛋白的磷酸化。在一组包括KRAS/HRAS和BRAF突变细胞系以及KRAS/HRAS和BRAF野生型细胞的人类肿瘤细胞系中，Ro 5126766能有效抑制MEK和ERK的磷酸化。为了研究甲戊酸途径是否影响MEK抑制剂的敏感性，我们对KRAS和BRAF突变的人乳腺癌MDA-MB-231细胞进行ro5126766 （CH5126766）处理，使用或不使用他丁类药物，抑制甲戊酸途径中的限速酶HMG-CoA还原酶。ro5126766与XU 62-320联合处理比ro5126766单独处理对细胞生长的抑制作用更明显，且呈剂量依赖性。40 nM的Ro 5126766和0.3 μM的XU 62-320对细胞的集落形成也有明显的抑制作用。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　在kras突变异种移植模型中，RO5126766 （RO5126766）比另一种变构MEK抑制剂PD0325901更有效地抑制生长和引起肿瘤退化。一系列人类肿瘤小鼠异种移植模型的临床前数据表明，Ro 5126766的ED50为0.03 ~ 0.23 mg/kg, ED90为0.15 ~ 1.56 mg/kg。这些有效剂量与靶槽浓度分别为17至133 ng/L和87至901 ng/mL相关。在本实验中，在HCT116模型中给药Ro 5126766 （CH5126766）和PD0325901，分别为其最大耐受剂量（MTD）（1.5 mg/kg和25 mg/kg）。在第一次给药后4小时，这些剂量在肿瘤中抑制pERK和ERK信号输出的程度相似。此外，在HCT116型号中，Ro 5126766和PD0325901的ED50分别为0.056和0.80 mg/kg。因此，本实验使用的剂量分别是50%有效剂量的26.8倍和31.3倍。每天口服任何一种药物都会导致这些肿瘤显著消退。然而，尽管在ro5126766治疗的小鼠中，肿瘤生长的抑制在整个28天的治疗期间保持不变，但接受PD0325901的肿瘤模型在治疗10天后变得难治性。

 

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　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　用Cell Counting Kit-8法评估存活细胞的数量。人乳腺癌MDA-MB-231细胞、人黑色素瘤SK-MEL-28细胞和人非小细胞肺癌A549细胞以每孔2000个细胞的密度接种在96孔板中，孵育24小时，然后用Ro 5126766（10、20、40和80 nM）处理72小时。用试剂盒试剂进一步孵育4小时后，使用多板分析仪测量样品在450 nM处的吸光度。

 

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　　动物实验方法

 

　　老鼠

 

　　雌性BALB-nu/nu小鼠（CAnN。Cg-Foxn1nu/CrlCrlj nu/nu）被给予标准鼠粮和自由饮水。共5×106 （HCT116）或1×107 （Calu-6和COLO205）肿瘤细胞被注射到7- 9周龄小鼠的右侧皮下。当肿瘤体积达到200 mm3（第0天）时，小鼠随机分组，对照[5% DMSO和10% 2-羟丙基-β-环糊精（HPCD）蒸馏水溶液]，Ro 5126766 （1.5 mg/kg或2.0 mg/kg）或PD0325901 （25 mg/kg）每天口服1次。药物以最大耐受剂量（MTD）给药。计算肿瘤生长抑制（TGI）。计算每种化合物的50%有效剂量（ED50）值。

 

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