AG-1478是EGFR酪氨酸激酶抑制剂

　　AG-1478 （Tyrphostin AG-1478） 是一种选择性的 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂，IC50 为 3 nM。AG-1478 对 HCV 和脑心肌炎病毒 （EMCV） 具有抗病毒作用。

 

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　　生物活性

 

　　体外

 

　　AG-1478（AG1478）对于在化学定义的DMEM / F12培养基中培养的人肺（A549）和前列腺（DU145）癌细胞系的生长调节是不可逆的。AG-1478在较低浓度下似乎更有效，但不能完全抑制A549细胞的生长。特定酪氨酸激酶抑制剂AG-1478（AG1478）对EGFR的抑制作用显着降低了心肌成纤维细胞对血管紧张素II介导的TGF-β和纤连蛋白的合成。EGFR被小分子抑制剂AG-1478和IC抑制50 的4 nM。通过流式细胞术评估，Polyfect（PF）和Superfect（SF）处理均导致HEK 293细胞凋亡增加至相似程度。抗氧化剂，tempol，可显着降低PF和SF的树枝状聚合物介导的凋亡。AG-1478（AG1478）的剂量（100μM）比信号研究中的剂量高10倍，被用作阳性对照并显着诱导HEK 293细胞凋亡

 

　　体内

 

　　在两个肥胖的小鼠模型中，施用AG-1478（AG1478）均可显着减少心肌炎症，纤维化，细胞凋亡和功能障碍。载脂蛋白E-/-首先给小鼠喂食HFD 8周（ApoE-HFD），然后再通过口服管饲法将AG-1478（10 mg / kg /天）或542（10 mg / kg /天）喂食8周。AG-1478或542治疗可在体内影响HFD诱导的心脏EGFR磷酸化，而不会影响血浆中低密度脂蛋白（LDL）和总甘油三酯（TG）的水平。给予EGF（10 nM）会导致EGFR磷酸化的稳定且可再现的升高，可被已知的EGFR磷酸化抑制剂AG-1478（AG1478）阻断。增加Polyfect（PF）剂量可导致EGF诱导的EGFR磷酸化显着降低（p <0.05），但程度要比AG1478少

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　将DU145（HTB-81）和A549（CCL-185）细胞以4×10的浓度接种在96孔板上3MEM（DU145细胞）或DMEM（A549细胞）中的细胞数/孔。孵育24小时后，将培养基替换为无血清DMEM / F12（1：1），并补充转铁蛋白（5 mg / mL），亚硒酸钠（2 ng / mL）和白蛋白（0.5 mg / mL）[ DMEM / F12 +]。再孵育24小时（第0天）后，用含酪氨酸激酶抑制剂AG494，AG-1478的无血清DMEM / F12 +培养基代替，其浓度范围分别为1-20μM和0.1-8μM。在37°C，潮湿的环境中继续孵育24小时。改良的结晶紫染色法（CV）和MTT分析法用于确定酪氨酸酪蛋白对靶细胞增殖的影响。使用Tecan多扫描板记录仪测量吸光度

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　老鼠

 

　　28 C57BL / 6或ApoE-/-将小鼠随机分为四个体重匹配组。用正常动物低脂饮食喂养7只小鼠，其中脂肪含量为10 kcal。％，蛋白质为20 kcal。％，碳水化合物为70 kcal。％，作为正常对照组（对照组或ApoE-LF），其余21只小鼠被喂养用高脂饮食喂养16周，脂肪含量为60 kcal。％的脂肪，20 kcal。％的蛋白质和20 kcal。％的碳水化合物。自9日在接下来的8周中，每天以10 mg / kg /天的剂量通过口管饲法给予AG-1478或542。对照组和HFD组中的小鼠只接受了媒介物（1％CMC-Na溶液）。在ApoE牺牲的前一天-/-在小鼠中，进行多普勒分析以确定病理性心脏肥大。

 

　　老鼠

 

　　在这项研究中使用了重约300g的雄性Wistar大鼠，并分为以下几组（N = 5）。第1组：非糖尿病（对照，C）动物，第2组：C + PF（10mg / kg作为单次腹膜内（ip）注射给药）第3组：C + SF（10mg / kg ip）。第4组：C + AG-1478（1 mg / kg ip）。第5组：单次腹膜内注射链脲佐菌素（55 mg / kg体重）诱导的患有4周糖尿病（D）的大鼠；第6组：D + PF（10 mg / kg ip ip）第7组：D + SF（10 mg / kg ip ip）和第8组：D + AG-1478（1 mg / kg ip ip）。在处死前，将AG-1478和树状聚合物治疗以单剂量给药24小时。在处死动物之前，在治疗前后评估大鼠的体重和基础葡萄糖水平。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。