LY2228820-Ralimetinib

　　Ralimetinib dimesylate （LY2228820 dimesylate） 是一种选择性，ATP竞争性的 p38 MAPK α/β 抑制剂，IC50 分别为5.3 和 3.2 nM。

 

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　　体外活性

 

　　LY2228820抑制原生264.7细胞中p38抑制和phosphoMAPKAPK-2 （pMK2）水平，IC50值分别为7 nM和34.3 nM。此外，LY2228820抑制脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF -的形成，其IC50为5.2 nM。在包括INA6、rmi -8226、U266和rmi - dox40在内的多发性骨髓瘤（MM）细胞中，瑞米替尼二甲基氨基丁酸（LY2228820） （200 nM-800 nM）显著阻滞p38MAPK信号，这表明其抑制了p38MAPK下游靶点HSP27的磷酸化，但不影响HSP27的表达水平。Ralimetinib dimesylate （200nm - 400nm）增强硼替佐米诱导的细胞毒性和细胞凋亡，但单独的Ralimetinib dimesylate不抑制MM.1S细胞的生长。LY2228820（200 nM-800 nM）也能抑制长期BM基质细胞（LT-BMSCs）、BM单核细胞（BMMNCs）、外周血CD138+、CD138-或PB CD14+细胞中IL-6和MIP-1的分泌。LY2228820二磺酸钠（400 nM-800 nM）也可以阻断CD14+细胞[2]的破骨细胞形成。

 

　　体内

 

　　在脂多糖诱导的小鼠中，LY2228820二磺酸能有效抑制TNF -瘤的形成，阈值50%有效剂量（TMED50）小于1 mg/kg。在胶原诱导关节炎（CIA）大鼠模型中，雷利美替尼对足跖肿胀、骨侵蚀和软骨破坏具有强大的作用，阈值50%有效剂量（TMED50）为1.5 mg/kg。在植入B16-F10黑色素瘤的小鼠中，LY2228820二磺酸盐以剂量依赖的方式抑制肿瘤磷酸化mk2 （TED50=1.95 mg/kg, TED70=11.17 mg/kg）。雷利美替尼二甲基氨基磺酸盐抑制MK2磷酸化：小鼠体内TED50=1.01 mg/kg（复合暴露约100 nM）和人体外IC50=0.12个红素M（小鼠或人PBMC）。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　使用重组人p38α在标准过滤器结合方案中使用ATP [γ-33P]和EGFR 21-mer肽作为底物。在雷美替尼存在下，通过LPS刺激确定鼠腹膜巨噬细胞中TNFα的功能抑制。为了更直接地评估细胞中的p38α活性，用雷美替尼处理RAW 264.7细胞，然后用茴香霉素刺激。使用磷酸MAPKAPK-2（pMK2）（Thr 334）抗体检测p38α活性水平，该抗体与被p38α特异性磷酸化的残基反应。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　在补充有L-谷氨酰胺，高葡萄糖和10％FBS的Dulbecco改良Eagle培养基中培养鼠B16-F10黑色素瘤细胞（GIBCO 11965-092）。将C57 / bl6小鼠植入B16-F10细胞（2×106），并且当肿瘤达到约200毫米时3在大小上，在1％羧甲基纤维素/0.25% Tween 80中口服雷美替尼二甲磺酸盐口服给药。给药后两小时，切下肿瘤，均质化并裂解以进行Western印迹分析。通过化学发光检测定量对总甘油醛-3-磷酸脱氢酶标准化的MK2磷酸化（p-Thr334）。50％或70％阈值有效剂量（TED50 和TED70在异种移植模型中，即分别观察到显着的靶标抑制作用时，计算得出的Ryimetinib dimesylate的有效剂量范围近似为大约有效剂量范围。TED50 或TED70 术语“剂量”定义为达到统计学显着效果的剂量，并且与媒介物对照相比分别具有至少50％或70％的抑制作用。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。