KU-5778-NU7441是DNA-PK抑制剂

　　KU-57788 是一种有效的，选择性的 DNA-PK 抑制剂，IC50 值为 13 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外

 

　　NU7441在0.3μM的无毒浓度下会在用低LET和高LET辐射照射的非小细胞肺癌细胞中引起放射致敏作用，并且在被照射的细胞中未显示出双链断裂修复抑制作用。NU7441（3μM）显示持久性γ-H2AX信号显着增加。NU7441（0.3μM）导致显着的G2 / M阻滞和DNA片段的显着增加，并增强了照射的H1299细胞的细胞衰老。NU7441（0.5至10 ?M）剂量和时间依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长。NU7441降低肝癌细胞中的pDNA-PKcs（S2056）蛋白表达。此外，NU7441和60CoγIR的双重处理会影响DNA损伤修复。NU7441暴露于BRD4中，该抑制剂可归为I型BRD抑制剂。NU7441减少NHEJ的频率，同时增加Cas9介导的DNA切割后HDR的速率

 

　　体内

 

　　低LET和高LET辐射辐照的肺癌细胞，并且在辐照的细胞中未显示出双链断裂修复抑制作用。KU-57788（3μM）显示持久性γ-H2AX信号显着增加。KU-57788（0.3μM）导致显着的G2 / M阻滞和DNA片段的显着增加，并增强了照射的H1299细胞的细胞衰老。KU-57788（0.5至10 ?M）剂量和时间依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长。KU-57788降低肝癌细胞中的pDNA-PKcs（S2056）蛋白表达。此外，KU-57788和60CoγIR的双重处理会影响DNA损伤修复。KU-57788用IC弱抑制BRD4和BRDT50分别为1μM和3.5μM。KU-57788被溶剂暴露于BRD4中，该抑制剂可分类为I型BRD抑制剂，KU-57788减少NHEJ的频率，同时提高Cas9介导的DNA切割后HDR的速率

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　DSF使用StepOnePlus实时PCR系统评估化合物对BRD4-1和BRDT-1的抑制活性。纯化的BRD4-1（终浓度4μM; 10 mM HEPES（pH7.5），100 mM NaCl和1 mM DTT）和BRDT-1（终浓度4μM; 50 mM磷酸盐（pH7.4），100 mM在96孔板中一式四份测定NaCl和1 mM DTT）。加入抑制剂至终浓度为100μM和2％DMS??O。蛋白热转移染料（1：8000）被用作荧光探针，并使用ROX Reporter通道（620 nm）测量荧光。通过对热循环仪进行编程以使用0.2°C的增量和每增量10 s的孵育时间将温度从25°C升高至99°C来研究蛋白质的稳定性。转变曲线的拐点/熔融温度（T米）是使用Protein Thermal Shift Software（v.1.1）中的Boltzmann方程计算的。JQ1（+）和dinaciclib分别用作BRD4-1强结合剂和弱结合剂的对照。ΔT米 通过使用DMSO控制井作为参考来计算。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　细胞测定

 

　　HepG2细胞（每孔4000个）在96孔板中培养24小时。细胞完成附着后，将0.1 ?M，1 ?M，5 ?M和10 ?M的KU-57788添加到培养基中。KU-57788处理12小时后，将10％CCK-8溶液添加到培养基中，继续孵育2小时。OD450值通过光谱仪确定，并分析结果以测量细胞生长。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。