Nutlin (3a)

    Nutlin 3a 是 Nutlin-3 的活性异构体，为一种鼠双微体 2 (MDM2) 抑制剂，抑制 MDM2-p53 相互作用，且稳定 p53 蛋白，因此诱导细胞周期停滞和细胞凋亡。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    作为TP53野生型卵巢癌的治疗化合物，Nutlin 3a（Nutlin-3a）是抑制MDM2，激活野生型p53和诱导细胞凋亡的治疗剂。具有野生型TP53的三种细胞系（HOC-7，OVCA429和A2780）对Nutlin 3a（IC 50 = 4至6μM）高度敏感。SKOV3细胞对Nutlin 3a 的IC 50为38μM。剩下的两个都是TP53野生型的卵巢透明细胞系（TOV21G和OVAS ）比TP53突变细胞系对Nutlin 3a（分别为IC 50 = 14和25μm）的生长抑制相对更敏感。Nutlin 3a（Nutlin-3a）是Nutlin-3的活性对映体。Nutlin 3a是高度选择性的MDM2拮抗剂和p53诱导剂。与10μMNutlin 3a孵育7天后，NIH / 3T3细胞的生长受到了90％以上的抑制，但不影响MEF的增殖，而MEF的两个靶均被消除。Nutlin 3a有效阻止了所有细胞系的细胞周期进程，将S期隔室消耗至0.2-2％，并增加了G 1和G 2 / M 相隔室，表明G 1和G 2逮捕。添加Nutlin 3a后3 h，p53靶标p21和MDM2显着升高，并在8 h达到最高水平。Nutlin 3a在40 h后诱导约60％的SJSA-1和MHM细胞凋亡，并在60 h后进一步增加（分别为85％和65％）。

 

    体内

 

    Nutlin 3a（Nutlin-3a）在所有模型中均有效，平均肿瘤生长抑制率≥98％。Nutlin 3a以剂量依赖的方式抑制异种移植物的生长，最高剂量（200 mg / kg）显示出明显的肿瘤缩小（八个部分和一个完全消退）。已建立的具有Nutlin 3a的SJSA-1和MHM骨肉瘤异种移植物导致广泛的肿瘤消退。

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    将所有15个细胞系以1×10 3个细胞/ 孔的密度接种在96孔板中。24小时后，更换培养基，并用递增浓度的Nutlin 3a（1μM，5μM，10μM，25μM，50μM和70μM）处理细胞。孵育72小时后，将WST-1加入每个孔中，并使用酶标仪（酶标仪）以450 nm的吸光度测量剩余的活细胞数。根据需要以较小滴度的Nutlin 3a重复实验，以确定细胞系的确切IC 50。定义了IC 50。再次以与上述相同的方式铺板，并在其各自的IC 50下用Nutlin 3a处理，然后在24、48和72h加入WST-1并进行细胞活力测量.

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    动物管理局

 

    小鼠

 

    每天向小鼠口服带有sc肿瘤异种移植物的裸鼠（SJSA-1，LnCaP和22Rv1研究中每组10只小鼠，MHM研究中每组15只小鼠）每天口服两次Nutlin 3a（50-200 mg / kg）或媒剂（1％Klucel，0.1％Tween 80）2周（22Rv1和LnCap）或3周（SJSA-1和MHM）。用卡尺测量肿瘤体积并计算。对于Western印迹分析，将具有SJSA-1肿瘤（200-400 mm 3）的裸鼠（每组三只动物）以150 mg / kg的剂量（分别在0、8和24小时）使用三剂量的Nutlin 3a进行治疗最后一次给药后3小时收集肿瘤，将肿瘤样品速冻并处理。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。