Z-VAD(OMe)-FMK
2019-03-14 
MCE小分子
Z-VAD(OMe)-FMK 是一种可渗透细胞的不可逆 pan-caspase 抑制剂。
MCE的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
z-vad-fmk的生物活性
体外
Z-VAD（OMe）-FMK是一种广谱半胱天冬酶抑制剂，已被证明可抑制半胱天冬酶样蛋白酶的细胞内活化。 注射Z-VAD（OMe）-FMK可抑制肺组织中caspase-3的活性，并显着降低末端dUTP缺口末端标记阳性细胞的数量[1]。 在SAH之前1小时和之后6小时腹膜内施用Z-VAD（OMe）-FMK。 检查胱天蛋白酶-3和阳性TUNEL的表达作为细胞凋亡的标志物。 Z-VAD（OMe）-FMK抑制内皮细胞中的TUNEL和caspase-3染色，降低caspase-3活化，降低BBB通透性，缓解血管痉挛，消除脑水肿，并改善神经功能[2]。 Z-VAD（OMe）-FMK是一种细胞渗透性半胱天冬酶抑制剂，可有效阻断SMN缺乏引起的细胞死亡。
体内
注射Z-VAD（OMe）-FMK可显着延长小鼠的存活率。所有小鼠在30小时内死于LPS。 相比之下，用Z-VAD（OMe）-FMK治疗的小鼠存活时间显着更长，27％的小鼠存活超过7天
z-vad-fmk的实验参考方法
细胞分析
含有dSMN编码序列的PCR产物（正向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG AAG ACG TAC GAC GAG TCG-3';和反向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG GTG GTG CTG GCT TCT TTC-3';产物长度，601bps;粗体和斜体字母代表T7启动子序列）和对照果蝇早老素（dPsn）基因（正向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG TG GCT GCT GTC AAT CTC-3 和;和反向引物：获得5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG CGA TAG CAA CGC TTC TTG-3';产物长度：543bps）并进行凝胶纯化。 通过用Ribomax T7转录试剂盒转录产生双链RNA（dsRNA），并用无Rnase的DNA酶消化。 将dsRNA产物乙醇沉淀并通过在65℃温育30分钟退火，然后在室温下缓慢冷却。 在1％agaorse凝胶上分析退火的dsRNA产物，以确保大多数dsRNA作为单一条带存在。 通过使用Cellfectin将dsRNA（2μg）和/或质粒DNA（2μg）引入细胞中。 通过在培养基中使用50μM的Z-VAD（OMe）-FMK来实现胱天蛋白酶抑制[3]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠
在该研究中使用的小鼠是5至6周龄（20至22g）ICR男性。 通过尾静脉从大肠杆菌血清型O111：B4向小鼠注射30mg / kg LPS。 在LPS注射前15分钟进行单次静脉内注射Z-VAD（OMe）-FMK（0.25mg），然后每小时静脉内注射三次Z-VAD（OMe）-FMK（每次0.1mg）。 对照小鼠用无菌盐水中相同体积的1％DMSO注射。
大鼠
将体重为300至350g的雄性Sprague-Dawley大鼠用α-氯醛糖（40mg / kg IP）和尿烷（400mg / kg IP）麻醉。 对动物进行插管，并用小型动物呼吸器维持呼吸。 使用加热垫将直肠温度维持在37±0.5°C。 分离左外颈动脉，并通过颈内动脉插入4.0单丝尼龙缝合线以穿透大脑中动脉。 在每只大鼠尸检时确认SAH。 假手术的大鼠经历相同的程序，除了在感觉到抵抗后撤回缝合线。 在SAH诱导前1小时和6小时腹膜内注射Z-VAD（OMe）-FMK（每0.3mL50μM）。 在赋形剂组中，对大鼠进行SAH诱导，并用相同体积的载体（在生理缓冲液中稀释的DMSO）处理。 在假手术动物中不进行任何治疗。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
MCE的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
z-vad-fmk的生物活性
体外
Z-VAD（OMe）-FMK是一种广谱半胱天冬酶抑制剂，已被证明可抑制半胱天冬酶样蛋白酶的细胞内活化。 注射Z-VAD（OMe）-FMK可抑制肺组织中caspase-3的活性，并显着降低末端dUTP缺口末端标记阳性细胞的数量[1]。 在SAH之前1小时和之后6小时腹膜内施用Z-VAD（OMe）-FMK。 检查胱天蛋白酶-3和阳性TUNEL的表达作为细胞凋亡的标志物。 Z-VAD（OMe）-FMK抑制内皮细胞中的TUNEL和caspase-3染色，降低caspase-3活化，降低BBB通透性，缓解血管痉挛，消除脑水肿，并改善神经功能[2]。 Z-VAD（OMe）-FMK是一种细胞渗透性半胱天冬酶抑制剂，可有效阻断SMN缺乏引起的细胞死亡。
体内
注射Z-VAD（OMe）-FMK可显着延长小鼠的存活率。所有小鼠在30小时内死于LPS。 相比之下，用Z-VAD（OMe）-FMK治疗的小鼠存活时间显着更长，27％的小鼠存活超过7天
z-vad-fmk的实验参考方法
细胞分析
含有dSMN编码序列的PCR产物（正向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG AAG ACG TAC GAC GAG TCG-3';和反向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG GTG GTG CTG GCT TCT TTC-3';产物长度，601bps;粗体和斜体字母代表T7启动子序列）和对照果蝇早老素（dPsn）基因（正向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG TG GCT GCT GTC AAT CTC-3 和;和反向引物：获得5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG CGA TAG CAA CGC TTC TTG-3';产物长度：543bps）并进行凝胶纯化。 通过用Ribomax T7转录试剂盒转录产生双链RNA（dsRNA），并用无Rnase的DNA酶消化。 将dsRNA产物乙醇沉淀并通过在65℃温育30分钟退火，然后在室温下缓慢冷却。 在1％agaorse凝胶上分析退火的dsRNA产物，以确保大多数dsRNA作为单一条带存在。 通过使用Cellfectin将dsRNA（2μg）和/或质粒DNA（2μg）引入细胞中。 通过在培养基中使用50μM的Z-VAD（OMe）-FMK来实现胱天蛋白酶抑制[3]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠
在该研究中使用的小鼠是5至6周龄（20至22g）ICR男性。 通过尾静脉从大肠杆菌血清型O111：B4向小鼠注射30mg / kg LPS。 在LPS注射前15分钟进行单次静脉内注射Z-VAD（OMe）-FMK（0.25mg），然后每小时静脉内注射三次Z-VAD（OMe）-FMK（每次0.1mg）。 对照小鼠用无菌盐水中相同体积的1％DMSO注射。
大鼠
将体重为300至350g的雄性Sprague-Dawley大鼠用α-氯醛糖（40mg / kg IP）和尿烷（400mg / kg IP）麻醉。 对动物进行插管，并用小型动物呼吸器维持呼吸。 使用加热垫将直肠温度维持在37±0.5°C。 分离左外颈动脉，并通过颈内动脉插入4.0单丝尼龙缝合线以穿透大脑中动脉。 在每只大鼠尸检时确认SAH。 假手术的大鼠经历相同的程序，除了在感觉到抵抗后撤回缝合线。 在SAH诱导前1小时和6小时腹膜内注射Z-VAD（OMe）-FMK（每0.3mL50μM）。 在赋形剂组中，对大鼠进行SAH诱导，并用相同体积的载体（在生理缓冲液中稀释的DMSO）处理。 在假手术动物中不进行任何治疗。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
