Fagomine

    Fagomine是一种温和的糖苷酶 (glycosidase) 抑制剂，Fagomine 作用于 Amyloglucosidase (A.niger)，β-Glucosidase (bovine) 和 Isomaltase (yeast)，Ki 分别为 4.8 μM，39 μM 和 70 μM。

 

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    Fagomine的生物活性

 

    体外

 

    Fagomine（D-fagomine）是一种亚氨基糖，已被证明可在体外选择性凝集肠杆菌。Fagomine选择性地凝集流苏的肠杆菌（例如大肠杆菌）并抑制它们与肠粘膜的粘附; 其原因可能与其与凝集素结合糖（例如甘露糖）的结构相似性有关。Fagomine能够改变高脂肪高蔗糖饮食（HFHS）对肠杆菌和大肠杆菌比例的影响。

 

    体内

 

    Fagomine（D-fagomine）是一种天然的亚氨基糖，能够抵消高能量密度饮食对体重，空腹血糖水平和肠肠杆菌比例的短期影响。与标准组相比，喂食含有Fagomine（D-fagomine）的高脂肪高蔗糖饮食（HFHS）的大鼠比喂食HFHS（20.9％）的人体重明显减轻（15.3％）

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    测定细胞裂解物中的溶酶体酶活性。简言之，将细胞在冰冷的0.1％Triton X-100水中刮擦。离心（在4℃下6000rpm，15分钟）以除去不溶物质后，使用Protein Assay Rapid Kit测定蛋白质浓度。将裂解物在37℃下与相应的4-甲基伞形基β-D-吡喃葡萄糖苷溶液在0.1M柠檬酸盐缓冲液（pH4）中温育。用荧光板读数器（激发340nm;发射460nm）测量释放的4-甲基伞形酮。对于酶抑制测定，在不存在或存在递增浓度的Fagomine的情况下，将来自正常皮肤成纤维细胞的细胞裂解物与4-甲基伞形基β-D-吡喃葡萄糖苷底物混合。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    来自健康和三个戈谢病患者（具有N188S / G183W，V230G / R296X和L444P / L444P突变）的人皮肤成纤维细胞在我们的实验室中用补充有10％FBS作为培养基的DMEM维持。对于酶活性增强测定，将细胞在不同浓度的Fagomine或DMSO（作为对照）存在下培养5天，并通过刮擦收获。通过测量培养上清液中的乳酸脱氢酶活性来监测Fagomine的细胞毒性。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    老鼠

 

    Sprague-Dawley大鼠（雄性，22周龄）随机分配到三个饮食组中的一个：对照组，喂食标准饮食（STD）; 一组喂HFHS（改良高脂肪高蔗糖饮食）; 和一组补充有0.065％Fagomine（HFHS + FG）的HFHS。调整Fagomine的百分比，使其与蔗糖的比例为2mg / g，如之前从餐后测试的结果所定义的。处理改良的饮食。在整个实验过程中每天监测饲料消耗，并在营养干预之前和结束时测量体重。所有动物操作都在早晨进行，以最小化昼夜节律的影响。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。