YM-155是Survivin抑制剂
2019-08-06 
MCE小分子
YM-155是 survivin 抑制剂，IC50为0.54 nM。
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生物活性
体外
YM155（30μM）对存活基因启动子驱动的荧光素酶报告基因活性不敏感。YM155通过转录抑制存活蛋白基因启动子显示出对具有缺陷型p53的PC-3和PPC-1人HRPC细胞中内源性存活蛋白表达的显着抑制。YM155（100nM）不影响c-IAP2，XIAP，Bcl-2，Bcl-xL，Bad，α-肌动蛋白和β-微管蛋白的蛋白质表达。YM155有效抑制人癌细胞系（突变或截短的p53），如PC-3，PPC-1，DU145，TSU-Pr1,22Rv1，SK-MEL-5和A375，IC 50分别为2.3至11 nM。YM155导致NSCLC细胞对γ-辐射的敏感性增加。YM155与γ-辐射结合增加了凋亡细胞的数量和胱天蛋白酶-3的活性。此外，YM155延迟了核DNA中辐射诱导的双链断裂的修复。
体内
YM155（3和10mg / kg）抑制PC-3异种移植物中的肿瘤生长，没有明显的体重减轻和血细胞计数减少。YM155在体内高度分布于肿瘤组织。YM155在PC-3原位异种移植物中以5mg / kg的剂量显示80％TGI。YM155与γ-辐射组合显示对裸鼠中的H460或Calu6异种移植物具有有效的抗肿瘤活性。在这种原位肾和转移性肺肿瘤模型中，YM155和IL-2可以显着降低肿瘤重量，肺转移和荧光素染色的肿瘤图像。
实验参考方法
激酶测定
使用Pyrobest聚合酶和以下引物通过PCR从人基因组DNA中分离出2,767-bp的人存活蛋白基因启动子序列：5'-GCGCGCTCGAGTCTAGACATGCGGATATATTC-3'和5'-GCGCGAA-GCTTTGGCGGTTAATGGCGCGC-3'。将得到的PCR片段用XhoI / HindIII消化，并连接到pGL3-Basic载体的XhoI / HindIII切割位点。得到的质粒命名为pSUR-luc。通过DNA测序仪对所有扩增的序列进行DNA测序。通过瞬时转染的HeLa-S3细胞的荧光素酶测定证实pSUR-luc的活性。进行荧光素酶测定。使用含有SV40启动子和增强子序列的pGL3对照载体。通过Lipofect-AMINE 2000用pSUR-luc和pSV2bsr稳定转染HeLa细胞。在10μg/ mL的杀稻瘟素选择后，根据适当的荧光素酶信号和随时间的遗传稳定性选择单个菌落并命名为HeLa-SURP-luc。用pGL3-对照和pSV2bsr稳定转染CHO细胞。在10μg/ mL的杀稻瘟素选择后，基于适当的荧光素酶信号和随时间的遗传稳定性选择单个菌落并命名为CHO-SV40-luc。来自HeLa-SURP-luc和CHO-SV40-luc克隆的库存细胞用于YM155的化学筛选和表征。将DMSO中的YM155加入到细胞中，其在前一天在96孔塑料板上以5×10接种。基于适当的荧光素酶信号和随时间的遗传稳定性选择单个菌落并命名为CHO-SV40-luc。来自HeLa-SURP-luc和CHO-SV40-luc克隆的库存细胞用于YM155的化学筛选和表征。将DMSO中的YM155加入到细胞中，其在前一天在96孔塑料板上以5×10接种。基于适当的荧光素酶信号和随时间的遗传稳定性选择单个菌落并命名为CHO-SV40-luc。来自HeLa-SURP-luc和CHO-SV40-luc克隆的库存细胞用于YM155的化学筛选和表征。将DMSO中的YM155加入到细胞中，其在前一天在96孔塑料板上以5×10接种。 每孔3个。24小时后测量荧光素酶活性。通过逻辑分析计算IC 50。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
细胞分析
测量YM-155的抗增殖活性。用YM-155处理48小时后，通过磺酰罗丹明B测定法测定细胞计数。通过逻辑分析计算GI 50值，该逻辑分析是在药物孵育期间导致对照细胞中净蛋白质增加（通过磺酰罗丹明B染色测量）减少50％的药物浓度。该测定一式三份进行，并且从四次独立测定的结果获得平均GI 50值。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
将5周龄雄性裸鼠（BALB / c nu / nu）用于测定。将PC-3细胞（2×10 6 -3×10 6）注射到小鼠的侧腹，使肿瘤体积达到> 100mm 3的肿瘤体积（长×宽2）×0.5）。使用植入的微渗透泵或每周五次静脉内施用YM-155作为每周3天连续输注给药2周，持续2周。使用下式计算每组施用初始YM-155后14天的肿瘤生长抑制百分比：MTV = 100×{1 - [（第14天处理组的MTV） - （处理组的MTV）第0天] / [（第14天对照组的MTV） - （第0天对照组的MTV）]}，其中MTV是平均肿瘤体积。对于冷冻肿瘤和血浆样品，通过蛋白质印迹和YM-155药物浓度通过高效液相色谱/三重四极杆质谱（LC / MS / MS）使用经验证的方法分析存活蛋白表达水平。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
