alpha-Amanitin

    alpha-Amanitin是几种致命毒蘑菇的主要毒素，通过抑制 RNA聚合酶II 发挥其毒性作用。

 

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    alpha-Amanitin的生物活性

 

    体外研究

 

    Alpha-Amanitin降低MKN45细胞中TAF15 mRNA和TAF15蛋白水平，并抑制RNAPII对TAF15 mRNA的活性。在浓度分别为100,10,1,0.1和0.01μg/ mL时，α-Amanitin使细胞活力降低14％，21％，41％，44％和50％。在36小时时α-Amanitin 的LD 50测量为1μg/ mL。与对照相比，1μg/ mL剂量的α-Amanitin在24小时内细胞内蛋白质的总量显着增加。Alpha-Amanitin显着降低卵丘细胞中间隙连接基因（Gja1，Gja4和Gjc1）和促性腺激素受体基因（FSHr和LHr）的表达。

 

    体内研究

 

    静脉内注射到BALB / c小鼠后，静脉注射LD 50剂量的α-Amanitin为0.327mg / kg体重。在尾静脉注射α-Amanitin 12小时后，WBC，RBC和HGB水平显着下降，而BUN和Crea水平在血清中显着增加。α-Amanitin抑制一些基因（Hsp90b1，Irx4等），其编码的蛋白质调节RNA聚合酶II活性。α-Amanitin下调参与转录进程的一些蛋白质（Nmi，Trpc5等）[1]。α-Amanitin在DTC抑制中具有强效活性。注射α-Amanitin（0.4 mg / kg，ip）治疗的小鼠维持体重，而接受腹膜注射MKN45细胞的小鼠则体重持续下降[2].

 

    alpha-Amanitin的实验参考方法

 

    细胞分析

 

    MTT测定用于评估培养细胞的总体功能完整性和活力。将MCF-7细胞置于96孔板（每孔2×10 4）中，孵育24小时。将α-Amanitin和β-Amanitin的特定浓度加入细胞培养基中，并将板再孵育36小时。然后将MTT溶液（1:10比例）和二甲基亚砜（DMSO）（100μL）加入细胞培养基中，并将板孵育过夜。在读板器上在570nm处测量吸光度。该实验重复3次。根据对照组，吸光度数据计算为百分比。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    对于致瘤性试验，将6个菌落（未处理的）和来自MKN45细胞的DTC分别皮下注射到6只6周龄雌性裸鼠（BALB / cAjcl-nu / nu）背部的左侧和右侧。在接种后监测这些小鼠49天或直到肿瘤达到最大直径10mm，然后实施安乐死。对于PC模型，将1.0×10 6个 MKN45细胞腹膜内注射到6只6周龄雌性裸鼠（BALB / cAjcl-nu / nu）中。然后用CIS（4.0mg / kg，腹膜内给药）或CIS和α-Amanitin的组合（0.4mg / kg，腹膜内给药）处理小鼠。对于联合治疗，在CIS前24小时给予α-鹅膏毒素。在治疗后监测体重28天。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考