Angiotensin 1-7

    Angiotensin (1-7) 抑制纯化的犬Angiotensin 转换酶 (ACE) 活性，IC50 为 0.65 μM。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    Angiotensin 1-7（Ang 1-7）通过抑制ACE和释放一氧化氮（NO）而充当激肽诱导的血管舒张的局部协同调节剂。Angiotensin （1-7）在用血栓烷类似物U46619预先收缩的环中以浓度依赖性方式增加由缓激肽（BK）诱导的血管舒张。EC 50在2μM浓度的Angiotensin （1-7）存在下，BK（2.45±0.51nM对0.37±0.08nM）向左移动6.6倍。Angiotensin （1-7）（0.1至2μM）以剂量依赖性方式增强BK诱导的松弛反应。在浓度为2μM的Angiotensin （1-7）时，与单独的BK相比，BK的松弛增加了92％（41±4.4％对92±2.5％，P <0.01）。Angiotensin （1-7）具有与Ang II不同的新型生物学功能。与Ang II相反，Angiotensin （1-7）不是二倍体或醛固酮促分泌素，但与Ang II类似，它刺激血管加压素，前列腺素和NO的释放。Angiotensin （1-7）抵消Ang II的几种作用。在犬冠状动脉和猪冠状动脉中，Angiotensin （1-7）引起血管舒张，而Ang II则分叉地收缩冠状动脉。Angiotensin 1-7（Ang 1-7）通过抑制NRK-52E细胞中TGF-β-ERK途径的慢性刺激来消除甲基乙二醛修饰的白蛋白（MGA）刺激的肌成纤维细胞表型。

 

    体内

 

    在结肠炎诱导后第7天，与未处理（UT）组相比，在硫酸葡聚糖钠（DSS）处理的小鼠中证实Angiotensin 1-7（Ang 1-7）的血浆水平降低7倍。另一方面，与UT小鼠（0.04 ng / mL）相比，在第7天（0.09 ng / mL）DSS处理的小鼠的结肠匀浆中观察到Ang 1-7的显着增加。卵巢切除的（OV）雌性Wistar-大鼠接受雌二醇（500μg/ kg /周）或载体两周。对动物进行麻醉，插管，并在肾灌注压恒定水平下对平均动脉压，肾血流量（RBF）和肾血管阻力作出反应，在0时分级输注Angiotensin 1-7（Ang 1-7）。在用OV或OV雌二醇处理的（OVE）大鼠中测定100和300ng / kg / min，用载体或MasR拮抗剂处理; A779。RB-1对Ang 1-7输注的反应在载体中呈剂量依赖性增加（P 剂量 <0.001）和A779治疗（P 剂量）<0.01）动物。然而，当MasR阻断时，与OVE大鼠相比，OV动物对Ang 1-7的RBF反应显着增加（P <0.05）。当雌二醇被卵巢切除术限制时，A779增加RBF对Angiotensin （1-7）给药的反应，而这种反应在OVE动物中减弱。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    使用固定浓度的底物Hip-His-Leu（1mM）测定使用纯化犬ACE的竞争测定，并改变竞争剂[赖诺普利（0.1至100nM），Angiotensin （1-7）（10nM）的浓度。至10μM），或Sar 1，Thr 8 -Ang II（10nM至10μM）]。抑制常数（IC 50）由各自的竞争曲线确定。为了研究Angiotensin （1-7）对完整冠状环中BK代谢的影响，将125 I- [Tyr 0 ] -BK（终浓度1 nM）加入含有3个预先与1 mL Krebs缓冲液孵育的环的试管中。并用95％O 2和5％CO 2充气在37°C。在添加放射性标记的BK之前10分钟将赖诺普利（2μM），Angiotensin （1-7）（2μM）或Krebs'缓冲液作为对照加入到环中。在5,10和20分钟取出孵育培养基的等分试样并用1％HFBA稀释以抑制肽酶活性。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    将500μM甲基乙二醛与溶解在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中的100μMABA温育24小时，然后在10kDa过滤器上洗涤以除去过量的甲基乙二醛，用DMEM / F12无血清培养基重构并通过0.2μmicron过滤器。制备TGF-β（5ng / mL）以处理实验子集中的细胞。细胞与以下一种或组合共同治疗：Angiotensin （1-7）（100 nM），D-Ala7-Ang-（1-7）（10μM），ERK1 / 2激酶抑制剂，PD 98059（1 μM），TGF-β受体激酶抑制剂; SB525334（1μM），AT 1受体拮抗剂氯沙坦（1μM），肾素抑制剂Aliskerin（1μM）和ACE抑制剂赖诺普利（1μM）。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠

 

    使用雄性和雌性BALB / c小鼠（1：1比例，6-10周龄，平均体重20g）。将Angiotensin 片段1-7乙酸盐水合物（Ang 1-7）以1mg / mL溶解于0.9％盐水（载体）中并储存在-80℃。从实验的每一天新鲜制备各种剂量（0.01,0.06,0.1,0.3和1mg / kg），并通过每次腹膜内（ip）注射以每次注射500μL的体积给予小鼠，在（预防性接近）之前或之后（治疗方法）DSS治疗。将A779（MAS-1R拮抗剂）类似地溶解在1mg / mL的蒸馏水中并储存在-80℃。通过每日腹膜内注射500μL每天（持续4天）以及结肠炎诱导（预防性方法），向第二组小鼠施用新制备的1mg / kg剂量。第三组小鼠接受含有水的DSS和每日ip注射0.9％盐水（载体）。第四组接受含有水的DSS以及每日腹膜内注射地塞米松（DEX），剂量为0.01-1.0mg / kg或其载体（0.9％盐水）（预防性方法）。

 

    大鼠

 

    使用重量为200±20g的26只卵巢切除的雌性Wistar大鼠。在拮抗剂/盐水输注后，通过微量注射泵以100和300ng / kg / min的两种不同连续剂量静脉内施用Angiotensin （1-7）。每次剂量输注15分钟; 在Angiotensin （1-7）输注期间记录MAP，RPP和RBF，并且每个剂量的最后3-5分钟测量为“对Angiotensin （1-7）输注的响应”。在Angiotensin （1-7）输注期间，RPP通过可调节的主动脉钳维持在Ang1-7前输注水平。在实验结束时，通过过量麻醉剂人道地杀死大鼠，取出左肾并立即称重。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。