磷酸氯喹Chloroquine phosphate

　　磷酸氯喹Chloroquine phosphate 是一种广泛用于疟疾和类风湿性关节炎的抗疟疾和抗炎剂。磷酸氯喹Chloroquine phosphate 是 autophagy 和 toll-like receptors (TLRs) 的抑制剂。磷酸氯喹Chloroquine phosphate 有效抑制 SARS-CoV-2 (COVID-19) 感染 (EC50=1.13 μM)。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　磷酸氯喹Chloroquine (CHQ，20 μM) 抑制 IL-12p70 释放并降低活化的人单核细胞衍生的朗格汉斯样细胞 (MoLC) 的 Th1 启动能力。Chloroquine (CHQ，20 μM) 增强 MoLC 中 IL-1 诱导的 IL-23 分泌，随后增加致敏 CD4+ T 细胞的 IL-17A 释放[1]。

 

　　磷酸氯喹Chloroquine (25 μM) 在亲本 MDA-MB-231 细胞中抑制常氧和缺氧条件下的 MMP-9 mRNA 表达。磷酸氯喹Chloroquine phosphate 对 MMP-2、MMP-9 和 MMP-13 mRNA 表达具有细胞、剂量和缺氧依赖性作用[2]。

 

　　使用 IRS-954 或 磷酸氯喹Chloroquine phosphate 抑制 TLR7 和 TLR9 在体外显著降低 HuH7 细胞增殖[3]。

 

　　磷酸氯喹Chloroquine phosphate (0.01-100 μM；48 小时) 有效阻断病毒感染 (vero E6 细胞) 感染 SARS-CoV-2 的低微摩尔浓度 (EC50=1.13 μM)。磷酸氯喹Chloroquine phosphate 通过增加病毒/细胞融合所需的内体 pH 值以及干扰 SARS-CoV细胞受体的糖基化来阻断病毒感染[4]。

 

　　体内研究

 

　　磷酸氯喹Chloroquine (80 mg/kg，ip) 不会阻止原位小鼠模型中具有高或低 TLR9 表达水平的三阴性 MDA-MB-231 细胞的生长[2]。

 

　　使用 IRS-954 或 磷酸氯喹Chloroquine phosphate 抑制 TLR7 和 TLR9 可显著抑制小鼠异种移植模型中的肿瘤生长。DEN/NMOR 大鼠模型中的 HCC 发展也被 磷酸氯喹Chloroquine phosphate 显著抑制[3]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测[2]

 

　　细胞在正常的培养基中与载体或25或50 μM氯喹一起在6孔板中培养，直到接近融合，然后用无菌的磷酸盐缓冲盐水（PBS）清洗，再在无血清培养基中进一步培养指示时间。在所需的时间点，废弃培养基，迅速收获细胞于裂解缓冲液中，并通过离心澄清。将上清液在还原性十二烷基硫酸钠（SDS）样品缓冲液中加热后，每道加载相同量的蛋白质（100 μg），样品在10%或4-20%梯度聚丙烯酰胺SDS凝胶中电泳，然后转移至硝酸纤维膜上。为了检测TLR9，膜上的条带在4°C下与抗TLR9抗体孵育过夜，抗体稀释比例为1:500，稀释液为含0.1%（v/v）吐温20的Tris缓冲盐水（TBST）。通过多克隆兔抗肌动蛋白确认加载均匀性。二级检测使用辣根过氧化物酶标记的二级抗体进行。蛋白带通过使用ECL试剂盒的化学发光法可视化。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。这些仅供参考。

 

　　动物实验[2]

 

　　对照组和TLR9 siRNA MDA-MB-231细胞（5×10^5个细胞在100 μL中）被接种到四周龄免疫缺陷小鼠（无胸腺裸鼠/nu Foxn1）的乳腺脂肪垫中。肿瘤细胞接种七天后开始治疗。小鼠每天接受腹腔注射（i.p.）氯喹（80 mg/kg）或载体（PBS）。动物每天监测临床症状。每周测量两次肿瘤，肿瘤体积根据公式V=(π/6)(d1×d2)^(3/2)计算，其中d1和d2是垂直肿瘤直径。允许肿瘤生长22天，此时将小鼠处死并解剖肿瘤以进行最终测量。在整个实验过程中，动物在控制的无病原环境条件下饲养（温度20-21°C，相对湿度30-60%，12小时光照周期）。小鼠食用小动物颗粒饲料，提供无菌水随意饮用。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。这些仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Said A, et al. Chloroquine promotes IL-17 production by CD4+ T cells via p38-dependent IL-23 release by monocyte-derived Langerhans-like cells. J Immunol. 2014 Dec 15;193(12):6135-43.

 

　　[2]. Tuomela J, et al. Chloroquine has tumor-inhibitory and tumor-promoting effects in triple-negative breast cancer. Oncol Lett. 2013 Dec;6(6):1665-1672.

 

　　[3]. Mohamed FE, et al. Effect of toll-like receptor 7 and 9 targeted therapy to prevent the development of hepatocellular carcinoma. Liver Int. 2014 Jul 2. doi: 10.1111/liv.12626.

 

　　[4]. Colson P, et al. Chloroquine and hydroxychloroquine as available weapons to fight COVID-19. Int J Antimicrob Agents. 2020;55(4):105932.