ABT-737抑制剂的作用机制
2024-12-25 
MCE
ABT-737 是一种 BH3 模拟物，是一种有效的 Bcl-2、Bcl-xL 和 Bcl-w 抑制剂，EC50 分别为 30.3 nM、78.7 nM 和 197.8 nM。ABT-737 诱导 BCL-2/BAX 复合物的破坏和 BAK 依赖性但不依赖 BIM 的内在凋亡途径激活。ABT-737 诱导自噬，并且具有用于急性髓系白血病 (AML) 研究的潜力。
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ABT-737抑制剂的生物活性
体外研究
ABT-737 与 BCL-2、BCL-XL 和 BCL-W 具有高亲和力 (Ki<1 nM)，但与其他抗凋亡 BCL-2 家族成员（包括 MCL-1 和 BFL-1）的结合力较弱 (Ki>460 nM)。ABT-737 与 BCL-XL 和 BCL-2 的 BH3 结合槽结合。
ABT-737（100 nM；1-72 小时）诱导 HL-60 细胞凋亡并与化疗产生协同作用。
ABT-737（5、7.5、10 μM；72 小时）导致约 80% 的 HCT116 细胞死亡。BAX 敲除变体对 ABT-737 具有完全抗性。
ABT-737 对细胞周期分布没有影响。ABT-737 破坏 BCL-2/BAX 异二聚化并诱导 HL-60 白血病细胞中的 BAX 构象变化。
ABT-737 可诱导敏感细胞中 BAX/BAK 依赖性最大 O2 消耗率受损。MCF10A 细胞中稳定的 BCL-2 过表达可诱导 ABT-737 敏感的死亡状态。ABT-737 可诱导 B 细胞淋巴瘤细胞中剂量依赖性最大 O2 消耗率受损。
体内研究
ABT-737（20、30 mg/kg/天；腹腔注射；持续 21 天）在 20 和 30 mg/kg 剂量水平下分别可抑制 4 至 6 周龄 CB.17 Scid 小鼠（患有人类白血病 KG-1 细胞）的白血病负担 48% 和 53%。
ABT-737 显著延长了这种恶性白血病模型中小鼠的生存期。
ABT-737抑制剂的动物实验参考方法
激酶测定
为了确定GST-BCL-2家族蛋白与FITC标记的BIM BH3结构域（FITC-Ahx-DMRPEIWIAQELRRIGDEFNAYYAR）的结合亲和力，进行如下FPAs实验。简而言之，将100 nM GST-BCL-2家族融合蛋白在PBS中与ABT-737的系列稀释液孵育2分钟。然后，加入20 nM FITC-BIM BH3肽（FITC-Ahx-DMRPEIWIAQELRRIGDEFNAYYAR）。使用96孔黑板，通过Analyst TM AD Assay检测系统在10分钟后测量荧光偏振值。IC50值使用GraphPad Prism软件进行确定。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
细胞测定
将细胞用ABT-737、ABT-263或载体（DMSO）处理4小时，在XF24测定培养基中（6×10^4 MCF10A细胞，请参见下面的培养基成分）或RPMI 1640培养基中（1×10^6 B细胞淋巴瘤细胞），通过Annexin-V结合/PI排除或亚二倍体核确定法分析细胞凋亡。FACS分析在Becton Dickinson FACScan或FACScalibur仪器上进行。数据分析使用CellQuest软件。 相关产品推荐：维奈妥拉Venetoclax
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
动物给药
对于腹腔注射（i.p.）给药，将1 g/mL ABT-737的DMSO储备溶液添加到30%丙二醇、5% Tween 80和65% D5W（5%的葡萄糖水溶液）（pH 4−5；DMSO最终浓度≤ 1%）的混合物中。注射FD/ΔRaf-1:ER细胞的小鼠接收ABT-737（20和30 mg/kg/小鼠，每天腹腔注射21天，从细胞注射后的第1天开始（每组n=9-10只小鼠））或载体或不处理（对照）；注射人KG-1细胞的小鼠在细胞注射后第18天开始接受30 mg/kg的ABT-737。对于FD/ΔRaf-1:ER-luc细胞的非侵入性成像，麻醉的小鼠注射150 mg/kg的D-luciferin，并放置在体内成像系统中进行成像，总成像时间为2分钟。
MCE并未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。
ABT-737抑制剂的溶解性数据
动物实验：
请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。
以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：
——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；
以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶
方案 一
请依序添加每种溶剂： 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% Saline
Solubility: 2.5 mg/mL (3.07 mM); 悬浊液; 超声助溶
此方案可获得 2.5 mg/mL的均匀悬浊液，悬浊液可用于口服和腹腔注射。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
生理盐水的配制：将 0.9 g 氯化钠，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理盐水溶液。
方案 二
请依序添加每种溶剂： 10% DMSO → 90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: 2.5 mg/mL (3.07 mM); 悬浊液; 超声助溶
此方案可获得 2.5 mg/mL的均匀悬浊液，悬浊液可用于口服和腹腔注射。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。
2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。
方案 三
请依序添加每种溶剂： 10% DMSO → 90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (3.07 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。
