UK-5099是MPC线粒体丙酮酸转运蛋白抑制剂

　　UK-5099 (PF-1005023) 是线粒体丙酮酸转运蛋白 (MPC) 的有效抑制剂， 抑制丙酮酸依赖性O2消耗的 IC50 值为50 nM。

 

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　　UK-5099抑制剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　锥虫丙酮酸载体被发现对 alpha-cyano-4-hydroxycinnamate (Ki=17 mM) 的抑制作用相当不敏感，但可以被 UK-5099 (Ki=49 microM)[2]。UK-5099 还抑制单羧酸转运蛋白 (MCT)[3]。UK5099 以剂量依赖性方式显著抑制葡萄糖刺激的耗氧量增加，并且在 150 μM 时将耗氧量降低到基础水平以下。UK5099 降低 832/13 细胞中的 ATP 水平并增加 ADP 和 AMP 水平[4]。UK5099 处理的细胞显示出显著更高比例的侧群分数，并表达更高水平的干性标记物 Oct3/4 和 Nanog。UK5099 应用可能是 Warburg 效应研究的理想模型[5]。

 

　　体内研究

 

　　MPC 抑制剂 UK5099 增加了在 C57BLK 小鼠腹腔内葡萄糖耐量试验中观察到的葡萄糖偏移[4]。

 

　　UK-5099抑制剂实验参考方法

 

　　细胞检测[4]

 

　　832/13 细胞系用于实验。细胞活力使用 CellTiter Blue 测量。该检测基于细胞将瑞沙氟林还原为红氧氟林的过程。通过在585 nm波长下监测荧光发射，利用 Spectramax M5 微孔板读数器，以555 nm激发光进行观测。对于接受 UK5099 处理的细胞，在测量细胞活力之前，细胞需恢复 1 小时。数据以相对于未处理或 siCtrl 的倍数形式表示[4]。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药[4]

 

　　C57BLK 小鼠在葡萄糖挑战前禁食 16 小时。UK5099（32 μmol/kg 体重）或 DMSO 溶解在 PBS 中，在注射葡萄糖（1.5 mg 葡萄糖/g 体重）前 30 分钟注射到腹腔内。在葡萄糖注射后 0、10、20、30、60 和 120 分钟测量血糖水平[4]。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　UK-5099抑制剂的溶解性数据

 

　　动物实验：

 

　　请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。

 

　　以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：

 

　　——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；

 

　　以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶

 

　　方案 一

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  40% PEG300  →  5% Tween-80  →  45% Saline

 

　　Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.67 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。

 

　　生理盐水的配制：将 0.9 g 氯化钠，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理盐水溶液。

 

　　方案 二

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  90% Corn Oil

 

　　Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.67 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Halestrap AP. The mitochondrial pyruvate carrier. Kinetics and specificity for substrates and inhibitors. Biochem J. 1975 April; 148(1): 85-96. 

 

　　[2]. Wiemer EA, et al. The inhibition of pyruvate transport across the plasma membrane of the bloodstream form of Trypanosoma brucei and its metabolic implications. Biochem J. 1995 Dec 1;312 ( Pt 2):479-84. 

 

　　[3]. Hinoi E, et al. A molecular mechanism of pyruvate protection against cytotoxicity of reactive oxygen species in osteoblasts. Mol Pharmacol. 2006 Sep;70(3):925-35. Epub 2006 Jun 9. 

 

　　[4]. Patterson JN, et al. Mitochondrial metabolism of pyruvate is essential for regulating glucose-stimulated secretion. J Biol Chem. 2014 May 9;289(19):13335-46. 

 

　　[5]. Zhong Y, et al. Application of mitochondrial pyruvate carrier blocker UK5099 creates metabolic reprogram and greater stem-like properties in LnCap prostate cancer cells in vitro. Oncotarget. 2015 Nov 10;6(35):37758-69.