Oridonin冬凌草甲素是AKT抑制剂

　　Oridonin冬凌草甲素 (NSC-250682) 是从 Rabdosia rubescens 中得到的二萜，为 AKT 抑制剂，对 AKT1 和 AKT2 的 IC50 值分别为 8.4 和 8.9 μM；Oridonin冬凌草甲素 具有抗肿瘤、抗菌、抗炎等功效。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Oridonin冬凌草甲素 是一种 ATP 竞争型 AKT 抑制剂，对 AKT1 和 AKT2 的 IC50 分别为 8.4 和 8.9 μM。Oridonin冬凌草甲素（5、10 或 20 μM）明显抑制 KYSE70、KYSE410 和 KYSE450 食道鳞状细胞癌（ESCC）细胞的生长，靶向 AKT1/2。Oridonin冬凌草甲素（10 或 20 μM）导致 KYSE70、KYSE410 和 KYSE450 细胞周期 G2/M 期停滞，并在这三条细胞系中以 20 μM 剂量诱导细胞凋亡。此外，Oridonin冬凌草甲素（5、10 或 20 μM）与顺铂或 5-FU 联合使用增强了对食道鳞状细胞癌细胞生长的抑制[1]。Oridonin冬凌草甲素（0.1 和 1 μM）优先抑制 AKT/mTOR 信号通路。Oridonin冬凌草甲素（1 μM）还选择性抑制 AKT 信号过度活化的乳腺癌细胞的生长[2]。

 

　　MCE 并未独立确认这些方法的准确性。这些方法仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　Oridonin冬凌草甲素（160 mg/kg，口服）在带有 EG9 和 HEG18 肿瘤细胞的 SCID 小鼠中显示出显著减少肿瘤生长，而没有明显的体重下降。Oridonin冬凌草甲素 治疗还抑制小鼠中 Ki-67、磷酸化 AKT、GSK-3β 或 mTOR 的表达[1]。Oridonin冬凌草甲素（15 mg/kg，腹腔注射）对裸鼠中 AKT 信号过度活化的乳腺癌细胞的生长产生不良影响[2]。

 

　　实验参考方法

 

　　酶活性测定[1]

 

　　对于 AKT 激酶测定，使用 ADP-Glo™ Kinase Assay Kit。将活性 AKT1 或 AKT2 激酶与不活跃的 GSK-3β 作为底物在 1× 反应缓冲液中混合，然后加入白色 96 孔板。试剂盒中提供的纯 ATP 进行梯度稀释以获得最终浓度为 0、1、10、50 和 100 μM。添加 GSK-3β，使其达到最终浓度为 2.5、5、10 或 20 μM，并使用 DMSO 作为对照。将混合溶液在室温下孵育，并使用 Luminoskan Ascent 板读数器测量荧光素酶活性[1]。 相关产品推荐：Deferoxamine mesylate甲磺酸去铁胺

 

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　　细胞实验[1]

 

　　将细胞（KYSE70 每孔 6×10³ 个细胞；KYSE410 每孔 2.5×10³ 个细胞；KYSE450 每孔 2×10³ 个细胞）接种于 96 孔板中，并孵育 24 小时，然后用不同量的 Oridonin冬凌草甲素 或载体处理。经过 24、48 或 72 小时的孵育后，通过 MTT 法测量细胞增殖。为了评估附着独立细胞生长，将悬浮在完全培养基中的细胞（2.5、5 或 10 μM Oridonin冬凌草甲素）添加到含有载体的 0.3% 琼脂的上层，上层中含有 2.5、5 或 10 μM Oridonin冬凌草甲素，底层为 0.5% 琼脂和载体、2.5、5 或 10 μM Oridonin冬凌草甲素。培养物在 37°C 的 5% CO2 培养箱中维持 3 周，然后在显微镜下观察并使用 Image-Pro Plus 软件程序计数克隆[1]。

 

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　　动物给药[2]

 

　　小鼠[2]

 

　　乳腺癌细胞被收集并重悬于 40% Matrigel-Basement Membrane Matrix（无 LDEV），然后注射（每个部位 100 μL）到裸鼠（CrTac: NCr-Foxn1nu）的第四对乳腺脂肪垫中。使用手动卡尺测量肿瘤的两个维度。肿瘤体积使用以下公式计算：体积 = 0.5 × 长度 × 宽度 × 宽度。每 2-3 天测量一次肿瘤体积。收获时，肿瘤在福尔马林中固定过夜，然后在 70% 乙醇中进行组织学分析。小鼠每天通过腹腔注射（IP）给予 Oridonin冬凌草甲素（15 mg/kg），配制在 1% Pluronic F68 中或使用载体（1% Pluronic F68）。BEZ235 按 1:9 比例重新组成于 1-甲基-2-吡咯烷酮和聚乙二醇 300 (PEG300) 中，小鼠每日口服灌胃该化合物配方 45 mg/kg[2]。

 

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　　参考文献

 

　　[1]. Song M, et al. Targeting AKT with oridonin inhibits growth of esophageal squamous cell carcinoma in vitro and patient derived xenografts in vivo. Mol Cancer Ther. 2018 Apr 25. pii: molcanther.0823.2017.  [Content Brief]

 

　　[2]. Sun B, et al. Oridonin冬凌草甲素 inhibits aberrant AKT activation in breast cancer. Oncotarget. 2018 Feb 1;9(35):23878-23889.  [Content Brief]