B-Raf抑制剂SB-590885

　　SB-590885 是一种有效的 B-Raf 抑制剂，Ki 值为 0.16 nM；对其选择性是对 c-Raf 的 11 倍多。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　SB-590885 显示出对 B-Raf 的显著选择性，其 Ki 值为 0.16 nM，相比于 c-Raf 的 1.72 nM。SB-590885 是一种比先前描述的 Raf/VEGFR 激酶抑制剂 BAY 439006 更强效的抑制剂（对突变 B-Raf 的 Ki 为 38 nM，对 c-Raf 为 6 nM）。SB-590885 对其他 46 种激酶表现出强效选择性。与多激酶抑制剂 BAY43-9006 不同，SB-590885 稳定致癌 B-Raf 激酶结构域处于活跃的构象。在表达致癌 B-RafV600E 的 Colo205、HT29、A375P、SKMEL28 和 MALME-3M 细胞中，SB-590885 处理有效抑制 ERK 磷酸化，其 EC50 分别为 28 nM、58 nM、290 nM、58 nM 和 190 nM，并且一致地抑制增殖，其 EC50 分别为 0.1 μM、0.87 μM、0.37 μM、0.12 μM 和 0.15 μM。SB-590885 以 BRAF 突变选择性的方式降低黑色素瘤细胞系的附着无关生长[1]。SB-590885 对 B-Raf 的亲和力高，Kd 值为 0.3 nM[2]。大多数携带 BRAF V600E 突变并缺乏 CDK4 突变的黑色素瘤细胞系（如 451Lu、WM35 和 WM983）对 SB-590885 高度敏感，IC50 < 1 μM。基因组扩增导致的细胞周期蛋白 D1 水平升高在 B-Raf V600E 突变黑色素瘤中介导 SB-590885 的耐药性[3]。

 

　　体内研究

 

　　SB-590885 的给药能有效减少来自突变 B-Raf 表达的 A375P 黑色素瘤细胞建立的小鼠异种移植模型中的肿瘤发生，并适度抑制肿瘤生长[1]。

 

　　MCE 并未独立确认这些方法的准确性。这些方法仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定[1]

 

　　对于增殖测定，细胞在0.1% DMSO中处理，并在37°C、5% CO2环境下孵育72小时。使用CellTiter-Glo试剂和Victor 2V板阅读器的荧光检测来量化存活细胞。根据制造商的说明，细胞准备进行细胞周期分析，使用Becton Dickinson FACScan设备。数据使用CellQuest v3.3软件采集和分析。无锚定生长测定按其他地方描述的方法进行，琼脂层中包含抑制剂或DMSO载体。培养物每5到7天用培养基和抑制剂或DMSO重新喂养，总共28天。通过常规光学显微镜观察和拍照并在三次重复中通过网格计数进行量化。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药[1]

 

　　在腹腔注射后，确定了SB-590885的药代动力学特性和安全性，发现每日50 mg/kg的注射能达到治疗水平且对体重变化影响较小。在8至12周龄的雌性裸鼠中，通过皮下注射5×10^6 A375P细胞的Matrigel悬液来诱导肿瘤，在肿瘤体积达到150到250 mm³后的3周，将小鼠随机分为八组进行处理。动物被给予载体[2% N,N-二甲基乙酰胺，2% Cremophor EL和96%酸化水（pH 4-5）]，或含有50 mg/kg SB-590885的载体，每日注射持续21天。然后，对接受SB-590885治疗的小鼠在停止治疗后观察额外14天。肿瘤体积通过卡尺每周测量两次，持续55天。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. King AJ, et al. Demonstration of a genetic therapeutic index for tumors expressing oncogenic BRAF by the kinase inhibitor SB-590885. Cancer Res, 2006, 66(23), 11100-11105.

 

　　[2]. Takle AK, et al. The identification of potent and selective imidazole-based inhibitors of B-Raf kinase. Bioorg Med Chem Lett, 2006, 16(2), 378-381.

 

　　[3]. Smalley KS, et al. Increased cyclin D1 expression can mediate BRAF inhibitor resistance in BRAF V600E-mutated melanomas. Mol Cancer Ther, 2008, 7(9), 2876-2883.