抑制剂Sorafenib Tosylate甲苯磺酸索拉非尼

　　甲苯磺酸索拉非尼Sorafenib Tosylate (Bay 43-9006 Tosylate) 是一种有效的口服活性 Raf 抑制剂，对 Raf-1 和 B-Raf 的 IC50 分别为 6 nM 和 20 nM。甲苯磺酸索拉非尼Sorafenib Tosylate 是一种多激酶抑制剂，对 VEGFR2，VEGFR3，PDGFRβ，FLT3 和 c-Kit 的 IC50 分别为 90 nM，15 nM，20 nM，57 nM 和 58 nM。Sorafenib Tosylate 甲苯磺酸索拉非尼诱导细胞自噬 (autophagy) 和凋亡 (apoptosis)，并具有抗肿瘤活性。Sorafenib Tosylate甲苯磺酸索拉非尼 也是一种 ferroptosis 激动剂。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Sorafenib Tosylate 甲苯磺酸索拉非尼还抑制BRAFwt（IC50=22 nM），BRAFV599E（IC50=38 nM），VEGFR-2（IC50=90 nM），VEGFR-3（IC50=20 nM），PDGFR-β（IC50=57 nM），c-KIT（IC50=68 nM）和Flt3（IC50=58 nM）在生化测定中的作用[1]。

 

　　甲苯磺酸索拉非尼Sorafenib Tosylate诱导的c-Met、p70S6K和4EBP1磷酸化在与抗人类HGF抗体共同处理的10-0505细胞中显著减少，表明Sorafenib Tosylate甲苯磺酸索拉非尼的处理导致HGF分泌增加以及c-Met和mTOR靶标的激活[2]。

 

　　体内研究

 

　　索拉非尼氯化物（以10、30、50和100 mg/kg的剂量口服）治疗能够以剂量依赖的方式抑制06-0606和10-0505异种移植瘤的生长（P<0.01）。Sorafenib Tosylate甲苯磺酸索拉非尼显著降低了06-0606和10-0505异种移植瘤的生长速率。接受50 mg/kg和100 mg/kg索拉非尼治疗的小鼠06-0606肿瘤重量分别约为对照组的13%和5%。50 mg的索拉非尼剂量显著抑制了小鼠5-1318、26-1004和10-0505细胞系的肿瘤生长（P<0.01）。在50 mg剂量下，T/C比值（其中T和C分别为索拉非尼和载体治疗的肿瘤在治疗结束时的中位重量（mg））对于06-0606、26-1004、5-1318和10-0505异种移植瘤分别为0.13、0.10、0.12和0.49。与正常对照组100%的生存率相比，二乙基亚硝胺（DENA）组的生存率为73.3%，索拉非尼组为83.3%。与正常对照组相比，DENA组的肝指数显著增加（增加1.51倍，p<0.05），而索拉非尼治疗则显示出与DENA组相比肝指数显著下降（p<0.05）。Sorafenib Tosylate甲苯磺酸索拉非尼组的肝指数显著降至低于正常对照组的值。 相关产品推荐：Dabrafenib达拉非尼

 

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　　实验参考方法

 

　　激酶检测[1]

 

　　为了测试化合物对不同RAF激酶亚型的抑制作用，将Sorafenib添加到含有Raf-1（80 ng）、野生型BRAF或V599E BRAF（80 ng）及MEK-1（1 μg）的混合液中，在检测缓冲液中[20 mM Tris (pH 8.2)，100 mM NaCl，5 mM MgCl2和0.15% β-巯基乙醇]，最终DMSO浓度为1%。RAF激酶检测（最终体积为50 μL）通过加入25 μL的10 μM γ-[33P]ATP（400 Ci/mol）来启动，并在32°C下孵育25分钟。通过过滤到磷纤维素垫上收集磷酸化的MEK-1，并用1%的磷酸洗去未结合的放射性。通过微波加热干燥后，使用β-计数器定量过滤器上结合的放射性[1]。

 

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　　细胞检测[2]

 

　　将10-0505、06-0606和26-1004肿瘤细胞切碎并用改良的鹰培养基（MEM）清洗三次。通过800× g离心10分钟收集细胞。在无血清的MEM中，以3或6 μM的Sorafenib处理细胞，同时或不同时添加5 μg/mL抗人肝细胞生长因子（HGF）抗体，持续48小时。收集从载体或Sorafenib处理（不含抗人抗体）的条件培养基共2 mL，并使用VIVASPIN 20浓缩，采用西方印迹法测定条件培养基中分泌的HGF[2]。

 

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　　动物给药[2][3]

 

　　小鼠[2]

 

　　对于剂量反应实验，承载06-0606和10-0505异种移植瘤的小鼠口服给予四个剂量的Sorafenib（10、30、50和100 mg/kg），连续12天。每个治疗组由五只小鼠组成。为了研究Sorafenib的抗肿瘤效果，承载肿瘤的小鼠每日口服50 mg/kg的Sorafenib，持续12天。每个治疗组由14只动物组成，每项实验重复至少两次。治疗于肿瘤植入后第7天开始，此时HCC异种移植瘤的大小约为100 mm³。为了研究Rapamycin与Sorafenib对10-0505异种移植瘤生长的影响，承载肿瘤的小鼠（每组14只）每日口服200 μL载体、50 mg/kg Sorafenib、1 mg/kg Rapamycin或Rapamycin与Sorafenib联合治疗，持续规定的天数。使用游标卡尺每周至少监测肿瘤长度和宽度，以计算肿瘤体积：[ \text{体积} = \frac{\text{长度} \times \text{宽度}^2 \times \pi}{6} ]。研究结束时，处死小鼠并记录体重和肿瘤重量，并收集肿瘤进行分析。

 

　　大鼠[3]

 

　　在研究中，使用100-120克的雌性白化大鼠。经过适应期后，称量大鼠并随机分为三组：第一组（正常对照组；n=10）每日给予载体，持续8周。第二组（DENA组；n=15）接受一次性腹腔注射200 mg/kg DENA。第三组（Sorafenib组；n=12）在DENA腹腔注射后6周，每日口服Sorafenib，剂量为10 mg/kg，持续2周。实验结束时（8周），称量大鼠，使用醚麻醉后处死，解剖肝脏。新鲜肝脏用冰冷生理盐水洗涤两次，干燥于清洁纸巾上，再称重。肝脏指数的计算公式为[ \text{肝脏重量 (g)} / \text{最终体重 (g)} \times 100 ]。肝脏分为五个部分：一部分保存在10%福尔马林中用于组织病理检查，其他部分立即冷冻在液氮中并储存于−80°C。

 

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　　参考文献

 

　　[1]. Wilhelm SM, et al. BAY 43-9006 exhibits broad spectrum oral antitumor activity and targets the RAF/MEK/ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis. Cancer Res. 2004 Oct 1;64(19):7099-109.

 

　　[2]. Huynh H, et al. Sorafenib and rapamycin induce growth suppression in mouse models of hepatocellular carcinoma. J Cell Mol Med. 2009 Aug;13(8B):2673-83.

 

　　[3]. El-Ashmawy NE, et al. Sorafenib effect on liver neoplastic changes in rats: more than a kinase inhibitor. Clin Exp Med. 2016 Apr 16.

 

　　[4]. Zhu W, et al. Combination of sorafenib and Valproic acid synergistically induces cell apoptosis and inhibits hepatocellular carcinoma growth via down-regulating Notch3 and pAkt. Am J Cancer Res. 2017 Dec 1;7(12):2503-2514.