抑制剂Exatecan依喜替康

　　依喜替康Exatecan (DX-8951) 是一种 DNA 拓扑异构酶 I (topoisomerase I) 抑制剂，IC50 值为 2.2 μM (0.975 μg/mL)，可用于癌症研究。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Exatecan依喜替康是一种强效的拓扑异构酶I抑制剂，IC50为0.975 μg/mL。Exatecan Mesylate（DX-8951f）显著抑制多种癌细胞系的增殖，其中乳腺癌细胞、结肠癌细胞、胃癌细胞和肺癌细胞的平均GI50分别为2.02 ng/mL、2.92 ng/mL、1.53 ng/mL和0.877 ng/mL[1]。Exatecan Mesylate（DX-8951f）对PC-6和PC-6/SN2-5细胞表现出细胞毒性活性，平均GI50分别为0.186和0.395 ng/mL。Exatecan Mesylate（34 nM）在PC-6和PC-6/SN2-5细胞中稳定DNA-TopoI复合物[3]。

 

　　体内研究

 

　　Exatecan Mesylate（DX-8951f，3.325-50 mg/kg，静脉注射）在携带肿瘤细胞的小鼠模型中表现出抗肿瘤活性，并且没有导致毒性死亡[1]。Exatecan Mesylate（15, 25 mg/kg，静脉注射）在MIA-PaCa-2早期模型和BxPC-3早期模型中高度抑制了MIA-PaCa和BxPC-3原发肿瘤的生长。Exatecan Mesylate（15, 25 mg/kg，静脉注射）还显著抑制了BxPC-3的淋巴转移，并在BxPC-3晚期癌症模型中完全消除了肺部转移[2]。相关产品推荐：DNA 拓扑异构酶I抑制剂Exatecan mesylate依喜替康甲磺

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。这些信息仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　细胞 (5×10^6) 用 SDS 缓冲液裂解（10 mM HEPES, 2 mM 磷酸钠, 10 mM NaF, 10 mM 焦磷酸盐, 1 mM PMSF, 10 µg/mL leupeptin, 10% 二硫苏糖醇, 10% 甘油, 8% SDS, 42 mM Tris-HCl, 0.002% 溴酚蓝, pH 7.4）。全细胞裂解液中的蛋白质在 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶中分离，并转印至硝酸纤维素膜上。膜用人抗 Topo I 抗体处理，随后用辣根过氧化物酶标记的蛋白 A 处理。Topo I 特异性带使用 ECL 试剂进行检测。为了获得核提取物，细胞 (5×10^7) 用冰冷缓冲液清洗（2 mM K2HPO4, 5 mM MgCl2, 150 mM NaCl, 1 mM EGTA, 0.1 mM 二硫苏糖醇），重悬于含有 0.35% Triton-X100 和 PMSF 的缓冲液中，然后在冰上孵育 10 分钟。所得裂解液被离心，沉淀然后在 4°C 下用含 0.35 M NaCl 的缓冲液孵育 1 小时。离心后（18,000g, 10分钟），上清液（核提取物）的蛋白质浓度通过 Bradford 法使用蛋白质测定试剂盒确定。相同量的核蛋白用抗 Topo I 抗体进行西方印迹分析。

 

　　细胞测定

 

　　生长抑制实验在 96 孔平底微孔板中进行，培养结束时可活细胞的数量通过 MTT 测定法确定。因此，每孔 500-20000 个细胞在 150 μL 培养基中接种并生长 24 小时（P388、CCRF-CEM 和 K562 细胞为 4 小时），加入药物（包括 Exatecan Mesylate，以 150 μL 培养基/孔），或仅加入培养基作为对照，细胞再培养 3 天。加入 MTT（20 μL/孔，5 mg/mL 磷酸盐缓冲液），板子孵育 4 小时，随后以 800 g 离心 5 分钟，去除培养基，然后将形成的蓝色染料溶解在 150 μL DMSO 中，使用 Microplate Reader model 3550 在 540 nm 处测量吸光度。

 

　　动物给药

 

　　在 BxPC-3-GFP 和 MIA-PaCa-2-GFP 正统植入 3 周后，小鼠随机分成五组，每组 5 只，用于治疗目的。第 1 组作为阴性对照，不接受任何治疗。第 2 组和第 3 组分别接受 25 和 15 mg/kg/dose 的 Exatecan Mesylate 治疗。第 4 组和第 5 组分别接受 300 和 150 mg/kg/dose 的吉西他滨治疗。在 BxPC-3-GFP 正统植入 6 周后，小鼠随机分成三组，每组 20 只，用于治疗目的。第 1 组作为阴性对照，不接受任何治疗。第 2 组接受 25 mg/kg/dose 的 Exatecan Mesylate，第 3 组接受 300 mg/kg/dose 的吉西他滨。这两种药物的给药每周一次，总共治疗 3 周，停药 2 周，然后再继续治疗 3 周。在早期和晚期癌症模型中，每周测量一次原发肿瘤大小和体重。肿瘤体积使用公式 a × b² × 0.5 计算，其中 a 和 b 分别代表较大和较小的直径。在研究结束时，对小鼠进行安乐死并进行解剖，记录每只小鼠的最终肿瘤重量和原发肿瘤及转移灶的直接 GFP 图像。肿瘤生长 IR 使用公式 IR (%) = (1 − TWt/TWc) × 100 计算，其中 TWt 和 TWc 分别为处理组和对照组的平均肿瘤重量。

 

　　MCE 并未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Mitsui I, et al. A new water-soluble camptothecin derivative, DX-8951f, exhibits potent antitumor activity against human tumors in vitro and in vivo. Jpn J Cancer Res. 1995 Aug;86(8):776-82.

 

　　[2]. Sun FX, et al. Efficacy of camptothecin analog DX-8951f (Exatecan Mesylate) on human pancreatic cancer in an orthotopic metastatic model. Cancer Res. 2003 Jan 1;63(1):80-5.

 

　　[3]. Joto N, et al. DX-8951f, a water-soluble camptothecin analog, exhibits potent antitumor activity against a human lung cancer cell line and its SN-38-resistant variant. Int J Cancer. 1997 Aug 7;72(4):680-6.