JQ1抑制剂BRD4
2024-09-24 
MCE
(+)-JQ-1 (JQ1) 是一种有效特异性的可逆 BET bromodomain 抑制剂，抑制 BRD4(1/2) 的 IC50 分别为 77 nM 和 33 nM。(+)-JQ-1 激活自噬 (autophagy)
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生物活性
体外研究
(+)-JQ-1 代表溴结构域 BET 家族的一种有效、高度特异性和 Kac 竞争性抑制剂。(+)- JQ-1 (100 nM，48 h) 促进鳞状分化，表现为细胞纺锤形、扁平化和角蛋白表达增加。与 (-)-JQ1 (250 nM) 和载体对照相比，(+)-JQ-1 (250 nM) 在经处理的 NMC 797 细胞中诱导角蛋白的快速表达，如通过定量免疫组织化学所确定的。(+)-JQ-1 (与 (-)-JQ1 (250 nM) 相比) 会引发经处理的 NMC 797 细胞的时间依赖性强 (3+) 角蛋白染色[1]。添加 (+)-JQ-1 后几乎立即观察到自噬基因的去抑制[2]。(+)-JQ-1 是 BET 家族共激活蛋白 BRD4 的一种有效的噻吩二氮卓抑制剂 (Kd=90 nM)，通过 MYC 致癌基因的转录控制参与癌症的发病机制。(+)-JQ-1 的剂量范围研究证明有效抑制 H4Kac4 结合，小鼠 BRDT (1) 的 IC50 值为 10 nM，人 BRDT (1) 的 IC50 值为 11 nM[3]。
体内研究
已确定肿瘤的匹配小鼠队列随机接受 (+)-JQ1 (50 mg/kg) 或载体处理，每日腹膜内注射。在随机化之前和处理四天之后，通过 FDG-PET 成像评估小鼠。(+)-JQ1 处理观察到 FDG 摄取显著减少。肿瘤体积测量证实 JQ1 处理可减少肿瘤生长。(+)-JQ1 的药代动力学研究是在 CD1 小鼠静脉内和口服给药后进行的。静脉内给药 (5 mg/kg) 后 (+)-JQ1 的平均血浆浓度-时间曲线。静脉内 (+)-JQ1 的药代动力学参数显示出出色的药物暴露 (AUC=2090 hr*ng/mL) 和大约一小时的半衰期 (T1/2)。制定口服给药 (10 mg/kg) 后 (+)-JQ1 的平均血浆浓度-时间曲线。口服 (+)-JQ1 的药代动力学参数表现出出色的口服生物利用度 (F=49%)、血浆峰浓度 (Cmax=1180 ng/mL) 和药物暴露量 (AUC=2090 hr*ng)/mL)[1]。
实验参考方法
细胞测定
1.细胞系：使用 NUT 中线癌患者细胞系（797 和 11060）。 相关产品推荐：蛋白酶体抑制剂MG-132作用原理
2.培养条件：
797：在含有 10% 胎牛血清的 DMEM 培养。
11060：在含有 10% 胎牛血清的 RPMI 培养。
3.处理方案：
细胞被处理为：
250 nM (+)-JQ1
250 nM (-)-JQ1
等量 DMSO（0.025%）。
4.细胞收集：
在所需时间点，以 500× g 离心 5 分钟，温度 4°C，获取 2×10^6 个细胞。
用 PBS 清洗细胞。
5.固定步骤：
将沉淀重悬于 1 mL 冷 PBS 中。
在轻轻涡旋的同时，将其逐滴加入 9 mL 70% 乙醇中，放入一个 15 mL 聚丙烯离心管中。
将固定的细胞在 -20°C 冻存过夜。
6.离心和清洗：
第二天以 500× g 的速度在 4°C 离心 10 分钟。
用 3 mL 冷 PBS 清洗细胞。
7.染色过程：
将细胞重悬于 500 μL 溴化丙啶染色溶液中（成分：0.2 mg/mL RNAse A、0.02 mg/mL 溴化丙啶、0.1% Triton-X 在 PBS 中）。
在 37°C 孵育 20 分钟。
8.数据分析：
将样品转移到冰上，并在 BD FACS Canto II 上进行分析。
生成直方图，并使用 FlowJo 流式细胞仪分析软件进行细胞周期分析。
备注：MCE 并未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
动物给药方案
小鼠研究
实验对象：具有肿瘤的小鼠（CD1 雄性，体重 24-29 g）。
治疗方案：
随机分为两组，接受 (+)-JQ1（50 mg/kg）或载体，通过每日腹腔注射给药。
额外研究包括：
静脉尾部注射的单剂量 (+)-JQ1（5 mg/kg）。
口服灌胃研究（10 mg/kg）。
大鼠研究
实验对象：成年雄性斯普拉格-道利大鼠。
治疗方案：
给药载体或 (+)-JQ1（10 mg/kg），采用 IP 给药，剂量为体重的 1/100。
监测：每日检查死亡情况；在第 1、3、7、14 和 21 天记录体重。
治疗方案调整因不良反应而改变：
初始 4 天每天给予 50 mg/kg JQ1，之后改为每天 10 mg/kg 两次，持续至研究结束。
终点评估：
完成 3 周治疗的动物，评估睾丸质量、精子活动性和精子计数。
睾丸在 Bouin 固定液中固定，以备组织学分析。
另一半在温暖的 M16 缓冲液中切碎，用于精子计数和活动性研究。
备注：MCE 并未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
参考文献
[1]. Filippakopoulos P, et al. Selective inhibition of BET bromodomains. Nature. 2010 Dec 23;468(7327):1067-73.
[2]. Sakamaki JI, et al. Bromodomain Protein BRD4 Is a Transcriptional Repressor of Autophagy and LysosomalFunction. Mol Cell. 2017 May 18;66(4):517-532.e9.
[3]. Matzuk MM, et al. Small-molecule inhibition of BRDT for male contraception. Cell. 2012 Aug 17;150(4):673-84.
