抑制剂Tauroursodeoxycholate牛磺熊去氧胆酸

　　牛磺熊去氧胆酸Tauroursodeoxycholate (Tauroursodeoxycholic acid) 是一种内质网应激抑制剂。Tauroursodeoxycholate 显著降低凋亡分子如 caspase-3 和 caspase-12 表达。牛磺熊去氧胆酸Tauroursodeoxycholate 也抑制 ERK。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Tauroursodeoxycholate 牛磺熊去氧胆酸(TUDCA) 通过 PKCα 诱导丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1 (MKP-1)，抑制 ERK 磷酸化，从而抑制血管平滑肌细胞 (VSMC) 的活力和迁移。Tauroursodeoxycholate 通过 Ca2+ 依赖性 PKCα 易位抑制 ERK，从而抑制 VSMC 的增殖和迁移。牛磺熊去氧胆酸Tauroursodeoxycholate 可防止血小板衍生生长因子 (PDGF) 和血管损伤诱导的 MMP-9 表达。使用特异性 si-RNA 敲低 MKP-1 可恢复 Tauroursodeoxycholate牛磺熊去氧胆酸 (200 μM) 降低的 VSMC 活力，这表明 Tauroursodeoxycholate 的抗增殖作用取决于 MKP-1 的表达[1]。

 

　　体内研究

 

　　使用免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原 (PCNA) 和转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 测定，检查 Tauroursodeoxycholate (TUDCA) 对体内 VSMC 增殖和凋亡的影响。Tauroursodeoxycholate (10、50 和 100 mg/kg) 以剂量依赖性方式增加受损组织的 caspase 3 活性，表明 Tauroursodeoxycholate 诱导新内膜中 VSMC 的凋亡。使用受伤的组织，在受伤后 1 周与正常对照相比，进一步检查和比较 ERK 和 MMP-9 表达的磷酸化水平。球囊损伤增加了组织中 ERK 的磷酸化和 MMP-9 的表达。Tauroursodeoxycholate (10、50 和 100 mg/kg) 以剂量依赖性方式抑制 ERK 和 MMP-9 表达的磷酸化[1]。

 

　　Tauroursodeoxycholate 牛磺熊去氧胆酸(TUDCA) 是一种亲水性胆汁酸。牛磺熊去氧胆酸Tauroursodeoxycholate 作为细胞保护剂可改善肝功能，并可通过减少内质网应激和细胞凋亡来预防肝细胞癌。Tauroursodeoxycholate 显著降低凋亡分子的表达，如 caspase-3、caspase-12、C/EBP 同源蛋白、c-Jun N-末端激酶 (JNK)、激活转录因子 4 (ATF4)、X-box 结合蛋白 (XBP))，以及 Ang II 诱导的 ApoE-/- 小鼠中的真核起始因子 2α (eIF2α) (p<0.05)。牛磺熊去氧胆酸Tauroursodeoxycholate 减少 ApoE-/- 小鼠中血管紧张素 (Ang) II 诱导的腹主动脉瘤 (AAA) 形成。Tauroursodeoxycholate 以 0.5 g/kg/天的剂量用于处理 Ang II 诱导的 ApoE-/- 小鼠 (ER 应激抑制剂组)。收缩压 (141.3±5.6 mmHg vs 145.9±8.9 mmHg；p>0.05) 和总胆固醇水平 (663.6±88.7 mg/dL vs 655.7±65.4 mg/dL；p>0.05) 在 AAA 模型之间没有差异组和 Tauroursodeoxycholate 组。此外，与 AAA 模型组相比，牛磺熊去氧胆酸Tauroursodeoxycholate 组的最大主动脉直径明显更小 (0.95±0.03 mm vs 1.79±0.04 mm；p<0.05)。Tauroursodeoxycholate 组的 AAA 病变面积也小于 AAA 模型组 (0.37±0.03 mm2 vs 1.51±0.06 mm；p<0.05)[2]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测[1]

 

　　细胞活力和增殖使用Ez-Cytox进行测量。将血管平滑肌细胞（VSMCs）（5×10^3个细胞）种植在96孔板中，培养在平滑肌细胞生长培养基2（SMCGM2）中。经过血清饥饿后，将牛磺熊去氧胆酸（Tauroursodeoxycholate）（0、50、100和200 μM）添加到人类VSMC中，并根据需要与1,2-二（o-氨基苯氧基）乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸四（醋酸酯）（BAPTA，10 μM）和7-羟基斯他诺霉素（H7，10 μM）共同培养24小时。为了评估牛磺熊去氧胆酸对PDGF刺激的人类VSMC增殖的影响，将人类VSMC种植在96孔板中并培养。经过血清饥饿后，将牛磺熊去氧胆酸（0、50、100和200 μM）添加到人类VSMC中，视情况与PDGF-BB（50 ng/mL）一同使用并培养。在每个孔中加入10 μL的Ez-Cytox后，通过测量450 nm处的光密度来评估细胞活力[1]。

 

　　动物实验[1][2]

 

　　大鼠[1]

 

　　斯普拉格-道利大鼠在联合麻醉剂（氯胺酮，70 mg/kg；赛拉嗪，7 mg/kg 腹腔注射）下麻醉。牛磺熊去氧胆酸以不同浓度（即载体，10、50 和 100 mg/kg）每天口服一次，持续2周。通过用4%甲醛灌注固定颈动脉，然后将组织嵌入石蜡中，切片（8 μm）用H&E染色[1]。

 

　　小鼠[2]

 

　　30只8周龄的ApoE-/- C57BL/6雄性小鼠随机分为三组（每组n=10）：(i)假手术并注射生理（0.9%）盐水作为载体（正常组）；(ii) 在ApoE-/-小鼠的右侧腹部皮下植入微渗透泵，以释放Ang II（1000 ng/kg/min），持续28天（AAA模型组）；(iii) AAA模型小鼠每日以饮用水中0.5 g/kg/d的剂量处理牛磺熊去氧胆酸，持续4周（牛磺熊去氧胆酸组）。小鼠在Ang II输注28天后被处死[2]。

 

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　　参考文献

 

　　[1]. Kim SY, et al. Tauroursodeoxycholate (TUDCA) inhibits neointimal hyperplasia by suppression of ERK viaPKCα-mediated MKP-1 induction. Cardiovasc Res. 2011 Nov 1;92(2):307-16.

 

　　[2]. Qin Y, et al. Tauroursodeoxycholic Acid Attenuates Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm Formation in Apolipoprotein E-deficient Mice by Inhibiting Endoplasmic Reticulum Stress. Eur J Vasc Endovasc Surg. 2017 Mar;53(3):337-345.