Niraparib hydrochloride抑制剂

　　Niraparib hydrochloride (MK-4827 hydrochloride) 是一种有效的，具有口服活性的 PARP1 和 PARP2 抑制剂，IC50 值分别为 3.8 nM 和 2.1 nM。Niraparib hydrochloride 抑制 DNA 损伤修复，诱导凋亡 (apoptosis) 并具有抗肿瘤活性。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　在全细胞试验中，Niraparib 抑制 PARP 活性，EC50=4 nM 和 EC90=45 nM。Niraparib 抑制突变体 BRCA-1 和 BRCA-2 癌细胞的增殖，CC50 在 10-100 nM 范围内。Niraparib 在全细胞试验中表现出出色的 PARP 1 和 2 抑制作用，IC50 分别为 3.8 和 2.1 nM[1]。

 

　　为了验证 Niraparib 抑制这些细胞系中的 PARP，A549 和 H1299 细胞用 1 μM Niraparib 处理不同时间，并使用化学发光测定法测量 PARP 酶活性。结果表明，Niraparib 在处理后 15 分钟内抑制 PARP，A549 细胞在 1 小时达到约 85% 的抑制，H1299 细胞在 1 小时达到约 55% 的抑制[2]。

 

　　体内研究

 

　　Niraparib 具有良好的耐受性，并在 BRCA-1 缺陷癌症的异种移植模型中显示出作为单一药物的疗效。Niraparib 在体内具有良好的耐受性，并在 BRCA-1 缺陷癌症的异种移植模型中证明了作为单一药物的疗效。Niraparib 的特点是大鼠的药代动力学可接受，血浆清除率为 28 (mL/min)/kg，分布容积非常高 (Vdss=6.9 L/kg)，终末半衰期长 (t 1/2=3.4 h)，生物利用度极佳，F=65%[1]。

 

　　Niraparib 在这两种情况下均增强了 p53 突变体 Calu-6 肿瘤的放射反应，单次每日剂量 50 mg/kg 比每日两次 25 mg/kg 更有效[3]。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　酶测定在含有 25 mM Tris (pH 8.0)、1 mM DTT、1 mM 精胺、50 mM KCl、0.01% Nonidet P-40 和 1 mM MgCl2 的缓冲液中进行。PARP 反应包含 0.1 μCi [3H]NAD+ (200,000 DPM)、1.5 μM NAD+、150 nM 生物素化 NAD+、1 μg/mL 激活的小牛胸腺核酸和 1−5 nM PARP-1。使用基于 SPA 珠子的自反应在白色 96 孔板中以 50 μL 的体积进行。化合物（例如，Niraparib）在 96 孔板中以 11 点连续稀释制备，在 5% DMSO/H2O 中每孔 5 μL（10 倍浓缩）。通过首先加入 35 μL 缓冲液中的 PARP-1 酶并在室温下孵育 5 分钟，然后加入 10 μL NAD+ 和 DNA 底物混合物来启动反应。在室温下反应 3 小时后，通过加入 50 μL 的链霉亲和素-SPA 珠子（2.5 mg/mL 在 200 mM EDTA，pH 8）停止这些反应。5 分钟后，使用 TopCount 微孔闪烁计数器计数。IC50 数据由不同底物浓度的抑制曲线确定[1]。

 

　　MCE 未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　细胞测定

 

　　使用 HT 通用化学发光 PARP 测定试剂盒分析 A549 和 H1299 细胞中的 PARP 抑制。简要来说，细胞用 DMSO 或 1 μM niraparib 处理 15、30、60 或 120 分钟，然后进行胰蛋白酶消化，并转移到预冷的管中。细胞用冰冷 PBS 洗涤两次，并重悬于冷却的 PARP 提取缓冲液中。细胞悬液在冰上孵育 30 分钟，期间定期振荡以破坏细胞膜。悬液离心后，将上清液转移至冰上的预冷管中。96 孔板的组蛋白涂层孔用 1X PARP 缓冲液再水化，并在室温下孵育 30 分钟。移除 PARP 缓冲液后，加 20 μg 蛋白质（通过 Bio-Rad 蛋白质测定法确定）到每孔，随后加稀释的 PARP-HSA 酶和 1X PARP 缓冲液。条形孔在室温下孵育 60 分钟，用含有 0.1% Triton X-100 的 PBS 洗涤两次，然后用 PBS 再洗涤。将稀释的 Strep-HRP 添加到条形孔中，并在室温下孵育 60 分钟。再次按之前的方法洗涤孔。等体积的 PeroxyGlow A 和 B 混合后添加到孔中，然后立即使用读板机获得化学发光读数[2]。

 

　　MCE 未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　小鼠

 

　　雌性裸鼠 (Ncr Nu/Nu) 被随机分配到治疗组，每组 5 到 8 只小鼠，当肿瘤直径达到 6.0 mm 时开始进行 Niraparib 治疗。Niraparib 的剂量为 25 mg/kg 每日两次或 50 mg/kg 每日一次，持续 21 天，或者在肿瘤直径达到 8 mm 后 9 天停止治疗。当肿瘤达到 8.0 mm 直径（7.7-8.2 mm）时，给予分次局部肿瘤放射治疗（XRT）。对肿瘤带的腿部每天给予 2 Gy 放射治疗，持续 14 天，或者每天两次，持续 7 天，使用两个平行对置的 137Cs 源的小动物辐照装置，以 5 Gy/min 的剂量率进行。在放射治疗期间，未麻醉的小鼠被机械固定在夹具中，以便肿瘤位于直径 3.0 cm 的放射场中心，并且小鼠的身体得到屏蔽以避免辐射暴露。在同时给予 Niraparib 和放射治疗的当天，药物在当天的第一次放射剂量前 1 小时给药。