Probenecid丙磺舒

　　Probenecid 是一种有效的选择性瞬时受体电位香草酸受体通道 2 (TRPV2) 激动剂。Probenecid 还抑制 pannexin 1 通道。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Probenecid 有效抑制 MRP1 和 MRP2 对 ATP 依赖性活性囊泡 N-乙基马来酰亚胺谷胱甘肽 (NEM-GS) 的摄取。在较高的有机阴离子浓度下观察到 MRP1-ATPase 的显著抑制。MRP2 的 ATPase 活性受到 Probenecid (大约 KACT=250 μM)、磺吡酮 (KACT=300 μM) 和吲哚美辛 (K ACT=150 μM)，ATPase 激活甚至比 NEM-GS 更强。MRP2-ATPase 的有机阴离子激活遵循钟形曲线，Probenecid 的最大值在 2 mM 左右，磺吡酮为 800 μM，吲哚美辛为 400 μM[2]。

 

　　Probenecid 是 hTAS2R16、hTAS2R38 和 hTAS2R43 苦味受体的抑制剂。Probenecid 作用于 TAS2R 的一个子集，并通过一种新颖的变构作用机制进行抑制。Probenecid 也常用于增强 GPCR 钙动员测定中的细胞信号。Probenecid 特异性抑制苦味受体 hTAS2R16 介导的细胞反应，并为使用非竞争性 (变构) 机制与该 GPCR 直接相互作用提供分子和药理学证据[3]。

 

　　体内研究

 

　　Probenecid 导致 WT 小鼠收缩力增加，如通过射血分数 (EF) 测量的，相对于给予盐水的对照小鼠中的 EF。在所有剂量为 75 mg/kg 或以上时，在推注后 5 分钟内注意到收缩力增加 (75mg/kg、100mg/kg 和 200mg/kg 的峰值变化为 5.26±3.35、8.40±2.80、7.32±2.52，分别)。以 5 分钟间隔 (总共 30 分钟) 测量的收缩力变化表明收缩力呈剂量依赖性增加，估计 EC50 为 49.33 mg/kg。在经过较长时间评估的受试者 (n=5，剂量为 200 mg/kg IV) 中，EF 保持在升高状态至少 1 小时 (EF 相对于基线的平均增加 8.9±2.57)[1]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测[1]

 

　　HEK-293T 细胞使用 Lipofectamine 2000 在涂有聚赖氨酸的黑色384孔板（底部透明）中转染 hTAS2R 表达构建体，并在37°C下孵育22小时。去除生长介质后，用含20 mM HEPES 的 HBSS 洗涤细胞两次，然后在含20 mM HEPES 的 HBSS 中加载钙指示剂染料（钙4检测试剂盒），可选择性地加入1 mM Probenecid。细胞在含染料和 Probenecid 的条件下在37°C下孵育1小时，随后转移到设定为32°C的 Flexstation II-384。在不洗脱的情况下进行15分钟的温度平衡，随后在 t=——25秒时注入指示化合物，测量荧光100至180秒，每3秒读取一次。数据集使用 Prism 5.0 软件进行分析，并以基线信号的百分比表示。对于 Schild 图，原始钙通量值的重复结果以基线信号的百分比表示。每种浓度 TAS2R 配体在指定浓度 Probenecid 存在下的36秒的平均值（对应最大通量信号）与配体浓度的对数绘制图形。数据点使用 GraphPad Prism 进行非线性回归拟合。

 

　　动物给药[1]

 

　　为了获得剂量反应曲线，对39只12-16周龄的雄性 C57 WT 小鼠（n=39）进行麻醉，使用异氟烷并在显微镜下获取静脉颈静脉访问（IV）。随后，按照下面描述的方法，在胸骨旁的长轴（PSLAX）进行 M 模式和 B 模式的超声心动图检查。注射生理盐水或不同剂量的 Probenecid（从2到200 mg/kg逐渐增加）用于 WT 小鼠的初始收缩力研究。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Koch SE, et al. Probenecid: novel use as a non-injurious positive inotrope acting via cardiac TRPV2 stimulation. J Mol Cell Cardiol. 2012 Jul;53(1):134-44.

 

　　[2]. Bakos E, et al. Interactions of the human multidrug resistance proteins MRP1 and MRP2 with organic anions. Mol Pharmacol. 2000 Apr;57(4):760-8.

 

　　[3]. Greene TA, et al. Probenecid inhibits the human bitter taste receptor TAS2R16 and suppresses bitter perception of salicin. PLoS One. 2011;6(5):e20123.

 

　　[4]. Silverman W, et al. Probenecid, a gout remedy, inhibits pannexin 1 channels. Am J Physiol Cell Physiol. 2008 Sep;295(3):C761-7.