Thiamet G抑制剂

　　Thiamet G 为有效，选择性的 O-GlcNAcase 抑制剂，抑制人 OGA 的 Ki 值为 20 nM。O-GlcNAcase 的作用是从修饰的蛋白质中去除 O-GlcNAc。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　我们将采用定制合成服务的方式为您快速提供所需产品和技术服务

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Thiamet G (1 μM) 明显增加 ATDC5 细胞的 O-GlcNAcylated 蛋白的积累。Thiamet G 诱导的 O-GlcNAc 积累也引起这些 MMP 活性的明显增加。Thiamet G (1 μM) 诱导 JNK、ERK 和 p38 的磷酸化，但不诱导 Akt[2]的磷酸化。Thiamet G (0.1-10 μM) 不会显著影响细胞活力。Thiamet G 降低 tau 的磷酸化并改变微管动力学[3]。

 

　　体内研究

 

　　Thiamet G (500 mg/kg/d) 增加全局和 tau O-GlcNAc 并减少神经变性。Thiamet G 处理组的运动神经元增加了 1.4 倍，并阻碍了该转基因模型中 tau 驱动的神经变性。因此，Thiamet G 处理对缺乏 P301L 转基因的小鼠没有可检测到的影响，表明只有在 P301L 转基因的情况下，Thiamet G 处理才能预防神经变性和体重减轻。在 Thiamet G 处理的小鼠中，大脑和脊髓组织中的 O-GlcNAc 增加[1]。

 

　　Thiamet G (20 mg/kg，腹腔注射) 以剂量依赖性方式增加 C57BL/6 小鼠大脑、肝脏和膝关节中的 O-GlcNAc 水平[2]。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　所有酶促测定均在37°C下以三次重复进行，使用4-甲基荧光酮N-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酸水合物作为底物。将1 nM纯化的OGA与化合物孵育5分钟，然后加入0.2 mM的底物。通过Tecan M200板在355/460 nm的激发/发射波长下，以60秒/周期和总共15个周期的模式监测4-甲基荧光酮的释放。

 

　　细胞测定

 

　　Jurkat细胞在96孔板中以每孔6000个细胞接种，12小时后，对细胞进行化合物处理，持续时间如所示。细胞活力通过XTT法测定。

 

　　动物给药

 

　　在Thiamet G剂量依赖性研究中，六只23天大的雄性C57BL/6小鼠接受单次腹腔注射0、10、20、100、200或500 mg/kg的Thiamet G（溶解于PBS），然后在8小时后安乐死，以评估不同组织（大脑、肝脏、肌肉和膝关节）的O-GlcNAc水平。选择牺牲的时间是基于先前在啮齿动物中发布的数据，这些数据表明，药物施用后O-GlcNAc蛋白的峰值水平在8-10小时达到。组织在牺牲后立即收集，迅速冷冻在液氮中，并在-80°C下保存，直到需要使用。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Yuzwa SA, et al. Increasing O-GlcNAc slows neurodegeneration and stabilizes tau against aggregation. Nat Chem Biol. 2012 Feb 26;8(4):393-9.

 

　　[2]. Andrés-Bergós J, et al. The increase in O-linked N-acetylglucosamine protein modification stimulates chondrogenic differentiation both in vitro and in vivo. J Biol Chem. 2012 Sep 28;287(40):33615-28.

 

　　[3]. Ding N, et al. Thiamet-G-mediated inhibition of O-GlcNAcase sensitizes human leukemia cells to microtubule-stabilizing agent NSC 125973. Biochem Biophys Res Commun. 2014 Oct 24;453(3):392-7.