Andrographolide穿心莲内酯
2024-09-07 
MCE
Andrographolide 是一种 NF-κB 抑制剂，通过共价修饰内皮细胞中 p50 的半胱氨酸残基而抑制 NF-κB 活化，而不影响 IκBα 降解或 p50/p65 核易位。Andrographolide 具有抗病毒作用。
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生物活性
体外研究
Andrographolide（AP）以浓度依赖的方式抑制受体活化因子核因子κB配体（RANKL）介导的破骨细胞分化和骨吸收，并减少破骨细胞特异性标记物的表达。Andrographolide通过对p50的还原Cys62进行共价修饰，抑制TNFα诱导的NF-κB激活，从而减轻炎症，而不影响IκBα降解或p50/p65的核转运。Andrographolide还在不影响p38或JNK信号通路的情况下抑制ERK/MAPK信号通路。Andrographolide以浓度依赖的方式抑制RAW 264.7细胞的破骨细胞分化。在BMMs和RAW 264.7细胞中，Andrographolide以浓度依赖的方式抑制破骨细胞形成，且没有明显的细胞毒性作用。Andrographolide处理显著减少了骨吸收的面积。经过2.5μM Andrographolide处理后，观察到的骨吸收仅为对照组的约30%。经过10μM Andrographolide处理后，破骨细胞的骨吸收几乎被完全抑制[1]。
体内研究
用Andrographolide（5或30 mg/kg）处理可减少LPS诱导的骨丧失程度。此外，与LPS处理相比，Andrographolide略微增加了骨矿密度（BMD）和皮质厚度。组织学检查证实了Andrographolide对LPS诱导的骨丧失的保护作用。LPS注射导致炎症性骨侵蚀和TRAP阳性破骨细胞数量增加[1]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。以上内容仅供参考。
实验参考方法
激酶测定[1]
体外破骨细胞生成实验用于研究穿心莲内酯对破骨细胞分化的影响。首先准备骨髓巨噬细胞（BMM）。简而言之，从6周龄的C57/BL6小鼠的股骨和胫骨中提取细胞，并在含有完整细胞培养基和30 ng/mL M-CSF的T-75 cm²培养瓶中孵育以进行增殖。当更换培养基时，细胞会被冲洗，以去除残余的间质细胞。在细胞达到90%汇合度后，用PBS洗涤三次，并用胰蛋白酶消化30分钟以收获BMM。附着在培养皿底部的细胞被归类为BMM；这些BMM以每孔8×10³个细胞的密度在96孔板中平板培养，分三组进行，并在37°C、5% CO2的湿润培养箱中孵育24小时。然后将细胞处理不同浓度的穿心莲内酯（0、2.5、5或10 μM）及M-CSF（30 ng/mL）和RANKL（50 ng/mL）。经5天后，对细胞进行固定并染色以检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性。计数具有五个以上核的TRAP阳性多核细胞作为破骨细胞[1]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
细胞测定[1]
穿心莲内酯对细胞增殖的影响通过CCK-8法确定。BMM以每孔3×10³个细胞的密度在96孔板中平板培养，分三组进行。24小时后，细胞用增加浓度的穿心莲内酯（0、2.5、5、10或20 μM）处理2天。接下来，向每孔添加10 μL CCK-8，然后在37°C下再孵育2小时。然后使用ELX800吸光度微孔读数器在450 nm波长（650 nm参考）下测量光密度（OD）。计算细胞活力[1]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
动物给药[1]
小鼠[1]
C57BL/6小鼠（8周龄）分为四组，每组七只小鼠。小鼠在注射LPS（5 μg/g体重）前1天腹腔注射穿心莲内酯（5或30 mg/kg体重）或PBS作为对照。穿心莲内酯或PBS每隔一天腹腔注射一次，持续8天。LPS在第一天和第四天腹腔注射。所有小鼠在初始LPS注射后8天被处死，所有动物的左侧股骨用高分辨率微CT扫描，分辨率为9 μm。
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参考文献
[1]. Zhai ZJ, et al. Andrographolide suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis in vitro and prevents inflammatory bone loss in vivo. Br J Pharmacol. 2014 Feb;171(3):663-75.
[2]. Gupta S, et al. Broad-spectrum antiviral properties of andrographolide. Arch Virol. 2017 Mar;162(3):611-623.
