抑制剂Ezetimibe依泽替米贝

　　Ezetimibe (SCH 58235) 是有效的胆固醇吸收 (cholesterol-absorption) 抑制剂。Ezetimibe 是一种 NPC1L1 抑制剂，是有效的 Nrf2 激活剂。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　抑制剂Ezetimibe依泽替米贝的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Ezetimibe (Eze) 是一种有效的 Nrf2 激活剂，不会引起细胞毒性。Ezetimibe 增强 Nrf2 的反式激活，正如荧光素酶报告基因检测所揭示的那样。Ezetimibe 还上调 Nrf2 靶基因，包括 Hepa1c1c7 和 MEF 细胞中的 GSTA1、血红素加氧酶-1 (HO-1) 和 Nqo-1。Ezetimibe 上调 Nrf2+/+ MEF 细胞中的 Nrf2 靶基因，而这种诱导在 Nrf2-/-MEF 细胞中被完全阻断。总之，Ezetimibe 以不依赖 ROS 的方式充当新型 Nrf2 诱导剂[1]。人 huh7 肝细胞用 Ezetimibe (10 μM，1 小时) 预处理，并与棕榈酸 (PA，0.5 mM，24 小时) 一起孵育以诱导肝脂肪变性。Ezetimibe 处理可显著降低 PA 升高的甘油三酯 (TG) 水平，这与我们的动物研究一致。PA 处理导致 ATG5、ATG6 和 ATG7 的 mRNA 表达减少约 20%，而 Ezetimibe 处理增加了这种表达。此外，Ezetimibe 处理显著增加了 PA 诱导的 LC3 蛋白丰度的降低[2]。

 

　　体内研究

 

　　Ezetimibe (Eze) 可减轻喂食甲硫氨酸和胆碱缺乏 (MCD) 饮食的小鼠的肝脏重量。这与 Ezetimibe 对肝脂肪变性的有益作用一致。肝脏组织学显示在 MCD 饮食的小鼠中有明显的多个大泡脂肪滴，但 Ezetimibe 处理显著减少了这些脂肪滴的数量和大小。此外，Ezetimibe 显著减轻了 MCD 饮食小鼠的肝纤维化[1]。Ezetimibe 处理的 OLETF 大鼠的血液和肝脏脂质水平，包括 TG、游离脂肪酸 (FFA) 和总胆固醇 (TC) 显著降低。此外，OLETF 大鼠的葡萄糖、胰岛素、HOMA-IR、TG、FFA 和 TC 血清水平高于 LETF 动物，而 Ezetimibe 可显著降低这些水平。此外，组织学分析表明，与年龄匹配的 LETO 对照组相比，OLETF 对照组大鼠肝细胞中的脂滴更大，依泽替米贝可使脂滴减弱[2]。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定[1]

 

　　GST-p62 由大肠杆菌制备，0.5 μg 纯化的 GST-p62 蛋白用于体外 AMPK 磷酸化测定。AMPK 对 p62 蛋白的磷酸化通过非放射性方法使用 γS-ATP 来确定。AMPK 复合体从 HEK293 细胞中免疫纯化，转染了 myc-AMPKα1 野生型 (WT) 或 myc-AMPKα1 激酶失活突变体 (KD, D157A)，以及 Flag-AMPKβ1 和 HA-AMPKγ1。将 AMPK 复合体加入含有 20 mM HEPES（pH 7.4）、1 mM EGTA、0.4 mM EDTA、5 mM MgCl2、0.05 mM DTT、0.5 μg GST-p62、0.2 mM AMP 和 1 mM ATPγS 的反应混合物中。反应在 37°C 下进行 30 分钟，用 20 mM EDTA 终止反应。为了检测 γS 标记的 p62 蛋白，反应产物用 2.5 mM PNBM 在室温下烷基化 2 小时，并用抗硫酸盐抗体通过西方印迹分析产物[1]。

 

　　细胞测定[2]

 

　　Huh7 人肝细胞在高葡萄糖 DMEM 中培养，培养基含 10% FBS、100单位/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素，在 37°C、95%空气/5% CO2 的气氛中。肝细胞在 Ezetimibe（10 μM，1 小时）处理后与棕榈酸（PA，0.5 mM，24 小时）共同孵育[2]。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药[1][2]

 

　　小鼠[1]

 

　　使用十周龄的 C57BL/6J 雄性小鼠。这些动物随机分配到三组（每组 7-10 只小鼠）：正常饲料组；MCD 饮食，载体处理组；或 MCD 饮食，Ezetimibe 处理组。小鼠可以自由获取饮食和水，环境温度维持在 23±2°C，相对湿度为 60%±10%，并保持 12 小时明暗循环。在 MCD 饮食与 Ezetimibe 组中，每天口服给予 Ezetimibe 10 mg/kg，持续 4 周。正常饲料组和 MCD 饮食载体组均口服相同体积的磷酸盐缓冲液，持续 4 周。整个治疗期间每周测量一次体重。4 周后，将小鼠麻醉后处死，通过心脏穿刺收集血液。采集的组织迅速冷冻于液氮中并存储于 -70°C，或固定在福尔马林中并嵌入石蜡中。

 

　　大鼠[2]

 

　　使用雄性 OLETF（n=11）和年龄匹配的 LETO 大鼠（n=3），实验在无特定病原体的设施中进行，保持 12 小时明暗周期。OLETF 大鼠是一种代表晚发性高血糖的模型，表现出慢性疾病过程、轻度肥胖和糖尿病临床发作。动物可随意获取水和食物。在 12 周龄时，大鼠随机分配，接受 PBS 或 Ezetimibe（10 mg/kg 每日）进行为期 20 周的胃管给药。研究结束时，大鼠禁食过夜，使用腹腔注射 Zoletil/Rompun 麻醉。血液从腹主动脉收集，肝脏组织被切除，立即冷冻于液氮中，并储存在 -80°C 以备进一步分析。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。